免疫组化法检测IHC实验技术服务
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IHC/ICC(免疫组化/免疫荧光)实验服务

 

服务名称

标本要求

实验周期

普通包埋

经固定后的组织

2个工作日

石蜡切片

蜡块

1个工作日

冰冻切片

固定组织、新鲜组织

4个工作日

脱钙

固定后的组织

7~15个工作日

HE染色

石蜡切片

1个工作日

免疫组化

切片、爬片

3~4个工作日

免疫荧光(单标)

切片、爬片

4~5个工作日

免疫荧光(双标)

切片、爬片

4~5个工作日

白光拍照

染好的片子

3个工作日

荧光拍照(单标)

免疫荧光(单标)片子

3个工作日内

荧光拍照(双标)

免疫荧光(双标)片子

3个工作日内

共聚焦拍照

免疫荧光片子

3个工作日内

 

客户提供:样本:细胞涂片、细胞爬片、组织冰冻切片、组织石蜡切片;或组织、蜡块均可。
     一抗(亦可由优宁维提供或代购,费用另计)

 

送样须知:市内可上门取样;外地可邮寄样本。


信息保护:LabEx对客户项目的专有技术和资料(包括试验方案、试验结果和样品等)负有绝对的保密责任

 

免疫组化原理:

 

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。


问题及其解答:

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?如何解决?

   1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。

   2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。

   3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;

   4)、非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;


   5)、 DAB孵育时间过长或浓度过高;


   6)、 PBS冲洗不充分,残留抗体结果增强着色,在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要;


   7)、标本染色过程中经常出现干片,这容易增强非特异性着色。

 

免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些?

 

   1)、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外,不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索最佳浓度。


   2)、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是最佳的时间和次数。若不行,还可高压修复。


   3)、组织切片本身这种抗原含量低;

 

   4)、血清封闭时间过长。


   5)、DAB孵育时间过短。


   6)、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。


   7)、开始做免疫组化,我建议你一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等外的方法问题。 

详见LabEx网站( http://www.u-labex.com)或来电咨询!
基因水平:PCR Array
蛋白水平:MSD、Luminex、CBA、Antibody Array、ELISA
细胞水平:磁珠分选、流式细胞分析
组织水平:多重免疫组化、病理分析

联系电话:4008-168-068 转3
联系邮箱:labex@univ-bio.com
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