荧光检测是基于荧光色素的使用，他们在受到较短波长的光激发时发光。荧光色素可直接与一抗或二抗结合，或与链霉素结合。免疫荧光常用于多个细胞目标的同时观察。例如，组织可与不同的一抗混合物孵育，在与结合有荧光色素的二抗孵育，这些荧光染料在不同波长下发光。
多色实验必须经过设计，以限制检测试剂之间的交叉反应，以及所使用的荧光染料在光谱性质上的交叉。为了限制二抗之间的交叉反应性，一抗应来自不同的物种。这样就能使用物种特异性的二抗，分别只识别一个一抗。不过，也有一些情况，需要同时使用同一个物种的抗体。这可通过使用一个生物素化的一抗来实现。在使用这种技术时，组织必须与生物素化的抗体孵育，再与荧光基团结合的二抗孵育。之后将组织与生物素化的一抗孵育，再与链霉亲和素结合的荧光色素孵育。这种方法确保链霉亲和素结合物只与生物素化的抗体结合，限制了交叉反应性。
荧光IHC染色所需主要试剂和材料
以下实验方案由RnD Systems IHC/ICC实验室设计并优化，使用Northernlights二级染色试剂。该方案须依据具体使用的组织类型进行适当调整。
试剂
★ 一抗
★ 抗淬灭封片剂
★ 封闭缓冲液：10%正常驴血清，0.3%Triton X-100
★ 稀释缓冲液：PBS(1X)，1%牛血清白蛋白，1%正常驴血清
★ 0.3%TritonTM X-100,0.01%叠氮化钠
★ 荧光二抗/链霉亲和素偶联物（类似产品）
★ PBS(1X):0.137M Nacl,0.05M NaH2PO4,pH7.4
★ 洗涤缓冲液:PBS(1X)
材料
★盖玻片
★带有石蜡包埋或冷冻组织切片的玻片
使用荧光显微镜的IHC染色
R&D systems 的 NorthernlightsTM一种用于IHC/ICC的荧光基团标记二级试剂
NorthernlightsTM二抗发射光强度高、抗淬灭，能够识别小鼠、山羊、绵羊、大鼠和兔子的lgG和lgY，和所有R&D Systems的抗体一样，Northernlights标记的抗体特异性号、信噪比高。同时我们还提供用于生物素标记抗体的链霉亲和素偶联物。
| 货号 | 品名和规 | 价格 |
| NL001 | Donkey Anti-Goat IgG NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL002 | Donkey Anti-Goat IgG NL637 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL003 | Donkey Anti-Goat IgG NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL004 | Donkey Anti-Rabbit IgG NL557 Affinit Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL005 | Donkey Anti-Rabbit IgG NL637 Affinit Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL006 | Donkey Anti-Rabbit IgG NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL007 | Donkey Anti-Mouse IgG NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL008 | Donkey Anti-Mouse IgG NL637 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL009 | Donkey Anti-Mouse IgG NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL010 | Donkey Anti-Sheep IgG NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL011 | Donkey Anti-Sheep IgG NL637 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL012 | Donkey Anti-Sheep IgG NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL013 | Goat Anti-Rat IgG NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL014 | Goat Anti-Rat IgG NL637 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL015 | Goat Anti-Rat IgG NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL016 | Goat Anti-Chicken IgY NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL017 | Goat Anti-Chicken IgY NL637 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL018 | Goat Anti-Chicken IgY NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL019 | Goat Anti-Mouse IgM NL557 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL020 | Goat Anti-Mouse IgM NL493 Affinity Purified PAb (0.5 ML) | 1620 |
| NL997 | NorthernLights Streptavidin NL493 (0.5 ML) | 1620 |
| NL998 | NorthernLights Streptavidin NL637 (0.5 ML) | 1620 |
| NL999 | NorthernLights Streptavidin NL557 (0.5 ML) | 1620 |
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