IHC之HRP-DAB显色检测
【显色检测】
为了方便显色检测，一抗、二抗或链霉亲和素可与酶结合。在加入可溶的有机底物时，酶与底物反应，产生不溶的有色产物，沉积在抗原表达的位置。常用的酶包括辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷酸酶，它们分别将3,3’二氨基联苯胺（DAB）和3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）转化成棕色和红色的终产物。DAB比AEC更常用，因为后者易溶于酒精，且暴露在过度光照下时更容易褪色。在使用AEC时必须用水性的复染剂和封片剂。
通常认为显色检测比免疫荧光更为灵敏，但没有那么方便，因为孵育和封闭步骤更多。与免疫荧光相似，显色检测也允许多个抗原的观察，但这些抗原只能在细胞和组织的不同位置，因为重叠的颜色可能会使结果难以解释。DAB显色检测的好处在于，HRP和DAB发生反应生成的有色沉淀物对光不敏感，玻片可保存数年。与需要专门光源和滤光片组合的荧光显微镜不同，显色技术只需要一般的光学显微镜。
—用HRP-DAB显色法检测组织切片
以下实验方案由R&D Systems IHC/ICC实验室设计并优化，使用HRP-DAB细胞和组织染色试剂盒。该方案须依据具体使用的组织类型进行适当调整。
【实验用品】
试剂
★ 水性封片剂（货号CTS011，或类似产品）
★ 一抗
★ 细胞和组织染色试剂盒：抗羊（货号CTS008）抗小鼠（货号CTS002），抗兔（货号CTS005）,
抗大鼠（货号CTS017）
试剂盒组份：过氧化物酶封闭剂，亲和素封闭试剂，生物素封闭试剂，生物素标记的二抗，高
灵敏度链霉素亲和素-HRP， 偶联物（HSS-HRP），DAB显色溶液，血清封闭试剂
★ 去离子水
★ 稀释缓冲液：PBS（1x），1%牛血清白蛋白，1%正常驴血清，0.3%TritonTMX-100和0.01%
叠氮化钠
★ PBS（1X）：0.137M Nacl,0.05M NaH2PO4,PH7.4
★ 洗涤缓冲液：PBS（1X）
★ 对于石蜡包埋的组织切片：
★ 二甲苯（混合异构体），100%乙醇，95%乙醇，70%乙醇，50%乙醇
可选试剂：
★ 抗原修复试剂()
★ DAB增强剂（货号CTS010）
材料：
盖玻片；组织学玻片；免疫染色笔
步骤：
冰冻切片和石蜡包埋组织切片的玻片准备详情请见官网
【细胞和组织染色试剂盒】
| 货 号 | 品 名 | 组分 | 规格 | 目录价 |
| CTS008 | Anti-Goat HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit | Secondary Biotinylated antibody，Streptavidin-HRP，DAB Chromogen，DAB Chromogen Buffer，Blocking Reagents | 50T | 2910 |
| CTS002 | Anti-Mouse HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS005 | Anti-Rabbit HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS017 | Anti-Rat HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS019 | Anti-Sheep HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS009 | Anti-Goat HRP-AEC Cell & Tissue Staining Kit | Secondary Biotinylated antibody，Streptavidin-HRP，AEC Chromogen，AEC Chromogen Buffer，Blocking Reagents | 50T | 2910 |
| CTS003 | Anti-Mouse HRP-AEC Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS006 | Anti-Rabbit HRP-AEC Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS018 | Anti-Rat HRP-AEC Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 | |
| CTS020 | Anti-Sheep HRP-AEC Cell & Tissue Staining Kit | 50T | 2910 |
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
