FCM 样本处理
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1、 培养的细胞

上海:消化分离收集后,用 PBS 清洗,洗去刺激药物或培养基后,重悬于培养基或 PBS,4℃ 运输,不可干冰运输(当天实验,适合上海本地)外地细胞冻存:
1、从培养箱中取出培养皿/板,镜下观察贴壁情况
2、确认贴壁后,放入操作台,贴壁轻轻吸去上清,不触碰皿/板底
3、加入适量的含有胰酶的培养液(以覆盖底部为主),消化 1-2min(可选)
4、镜下观察细胞情况,确认细胞形态略有变化,吸去消化液
5、用适量新鲜培养液,贴壁轻柔吹打细胞,至细胞从板底脱落
6、吸取含有细胞的培养液至细胞保存管中,离心,1000rpm/10min
7、弃去上清,用适量含有 5 左右的 DMSO 重悬(可用细胞保存液)
8、放入提前放在 4℃的细胞保存盒(加入异丙醇)中,4℃放置 30min,依次放入-20℃中30min,再放入到-80℃中 1h,最后转入液氮罐中保存

 

货号 名称 规格 备注
  abs9412   ES/iPS细胞冻存液   100ml    Serum-Free
   abs9413   无血清细胞冻存液(治疗级)   100ml    Serum-Free
   abs9417   无血清细胞冻存液(科研级)   100ml    Serum-Free
   abs47047375   胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红   100ml    不含酚红
   abs47014937   Trypsin (0.25%), Phenol Red   100ml    Phenol Red

 

2、组织

用 PBS 清洗干净后,用美天旎的保护液(可放置 48 小时)4℃保存,不可干冰以及-80℃

3、全血收集

用紫色抗凝管收集血液样本,收集后,上下颠倒,充分混匀样本和抗凝剂,4℃运输

4、PBMC 提取

(1) 取抗凝全血若干体积,和等体积 1*PBS 对半稀释,室温下吹打混匀
(2) 先在离心管底部铺上等稀释血量体积的淋巴细胞分离液,沿管壁(45°)缓缓加入稀释血,让稀释后的血铺在淋巴细胞分离液上,尽量不让血液进入淋巴细胞分离液。


(3) 室温,2000rpm,离心 20 分钟,加速度 0,减速度 0
(4) 可见离心后液体分为四层,从上到下一次为:血浆和血小板,单个核细胞(白膜层),分离液,多形核白细胞和红细胞。用将枪头插入分层中,只吸取灰色的单个核细胞层
(5) 所得 PBMC 悬液用 3-5 倍的 PBS 洗涤 2 次,每次离心 2000rpm,20min,若有红细胞,可以加适量裂红液进行裂红,裂红时间需根据红细胞量来确认裂红时间
(6) 提取PBMC 后,-80℃冻存,干冰运输。

详见LabEx网站( http://www.u-labex.com)或来电咨询!
基因水平:PCR Array
蛋白水平:MSD、Luminex、CBA、Antibody Array、ELISA
细胞水平:磁珠分选、流式细胞分析
组织水平:多重免疫组化、病理分析

联系电话:4008-168-068 转3
联系邮箱:labex@univ-bio.com
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