本周分享的是LabEx采用BD Celesta（3激光12色）对小鼠脾脏进行初始和效应T细胞以及Th17细胞和调节性T细胞（Tregs）9色分析实例。

整个panel全部为包括表面marker和核内转录因子，抗体使用量按照厂商推荐。

样本类型：小鼠（脾脏）

仪器：BD Celesta

实验Panel：

实验设置：

实验步骤：

1、小鼠脾脏研磨成单细胞悬液，过70um滤网，预冷1*PBS清洗

2、Ficol提取PBMC（若有红细胞，可再进行裂红处理），细胞计数（1.0x106个/ml）

3、24孔板种板，每孔1ml

4、细胞刺激：

4.1、每孔加入2ul刺激阻断剂；

4.2、37℃、5％CO2下孵育4-6小时；

4.3、孵育结束后吸取培养液至新的EP管中，300g离心5min；

4.4、弃上清，用1ml PBS重悬细胞沉淀，300g离心5min；

4.5、弃上清，用剩余液体重悬，用于后续实验操作；

5、细胞染色：

按照Live/Dead、FcR阻断剂、表面、破膜、胞内核内的顺序进行染色

实验结果

实验试剂

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