流式液相(CBA)技术详解
CBA检测原理
Cytometric Bead Array（CBA）微量样本多指标流式蛋白定量技术是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，能够同步测定单个样品中的多个指标。在日常实验中，常常需要对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测，例如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析。由于这些因子的含量通常较低，往往低于常规检测方法的检测下限，因此使用常见的蛋白检测方法（如Western Blot）难以实现有效检测。CBA系统通过利用一系列带有荧光标记的微小、分散的微球连结特定的捕获抗体，来捕捉溶液体系中的待测物。各种不同检测物对应的特异微球所带有的荧光强度不同，从而可以同时测定并分析样本中多种可溶性成分的数量。
CBA 系统工作原理简洁高效。针对每个检测指标，系统配备不同的捕获微球，其表面包被特异性捕获抗体，并具有独特荧光强度。将捕获微球与待测样品（如血清、血浆或细胞培养液）混合后，微球上的抗体与样品中的相应抗原或蛋白结合。随后加入荧光标记的检测抗体，形成 “三明治” 夹心复合物。利用流式细胞仪检测荧光信号，从而定量分析样品中各检测因子的含量。
每个微球相当于一个独立、预包被的 ELISA 板。与传统 ELISA 相比，CBA 系统的荧光信号检测灵敏度更高。结合流式细胞仪对荧光信号的高灵敏度检测和信号放大功能，该技术所需的样品浓度更低，实验时间更短。此外，常规 ELISA 每次只能检测一个样本中的单一指标，操作繁琐且耗费珍贵样本。而 CBA 系统可同时检测一个样本中的多个指标，为 ELISA 技术难以满足的实验提供了新的解决方案，特别适用于检测如患者血液中的免疫调节细胞因子（如 IFN-γ、TNF-α、IL-2 等）。
CBA技术特点（对比ELISA）
CBA 技术融合了 ELISA 和流式细胞术（FCM）的优点，是一种先进的液相蛋白检测手段。每种微球专一性地为一种蛋白提供捕获表面，与待测样品混合后形成悬浮状态，相较于 ELISA，这种状态能更高效地捕获目标分析物。同时，CBA 具备 FCM 宽广的荧光检测范围，使得检测样本需求量更少、速度更快、结果更精准。以下是其具体优势：
1.多重检测能力：CBA 技术最多可同时对一个样本中的 75 个目的蛋白进行精确定量分析，极大地提高了检测效率。
2.低样本需求量：每次检测仅需 50μL 溶液，非常适用于样本量有限的情况。
3.高灵敏度：分析灵敏度高达 2.8pg/mL，能够检测到极低浓度的蛋白质。
4.宽检测范围与良好重复性：CBA 技术的检测灵敏度可达 pg/mL 级别，检测范围为 0 - 5000pg/mL。整个分析过程只需一组标准曲线即可完成。通过检测抗体上的荧光强度来定量目的蛋白，避免了 ELISA 中因酶联放大反应而产生的假阳性结果。
5.灵活组合的检测对象 — CBA Flex Set：CBA Flex Set 允许根据研究需要灵活组合不同的捕获微球，以检测多个指标，最多可同时检测 75 个指标。除了具备 CBA kit 的优势外，Flex Set 还配备了独立的软件分析系统（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在 FACSArray Bioanalyzer 上直接使用 96 孔和 384 孔板进行操作。这种灵活性为研究者在免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等多个领域的蛋白定量分析中提供了更大的选择空间。
6.操作简便高效：CBA 技术采用芯片式集成测定，所有检测项目共用一组标准曲线，简化了操作流程。整个实验流程仅需 3.5 小时，支持对待测样本的实时分析，显著缩短了检测时间，提高了检测效率。
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