在前两篇中,我们探讨了多因子检测对统一标准的需求,以及标准曲线作为“统一标尺”的构建方法 。
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然而,构建了标尺只是第一步,如何确保这个“标尺”在不同批次、不同实验室间始终如一地精准,才是真正考验我们科学严谨性的地方,最终实现真正的“书同文”——数据互通,结果可比。
1.变异系数(CV):精准重现的“试金石”
在多因子检测中,变异系数(CV)是衡量检测结果精准度与重现性的关键指标。CV 是标准差与平均值的比值,计算公式为 CV=(Xmean/SD) ×100%,其中 SD 是标准差,Xmean是平均值。它以百分比形式呈现,能够有效剔除数据量纲和平均水平的差异,使不同实验或样本之间的变异性得以直观比较。
如上图所示,在单/多因子实验过程中,对每一个因子标准品的不同梯度,都会设置复孔,并计算信号值(MFI)/OD的CV值,CV 值越低,说明检测结果的离散程度越小,检测系统越稳定。
例如,CV 值低于 15% 表明检测方法精准可靠。然而,CV 仅反映相对离散程度,不能说明结果的绝对准确性。此外,样本量不足或异常值可能影响 CV 的计算结果。因此,CV 应与其他统计指标结合使用,以全面评估检测质量。
2.回收率(Recovery):衡量检测准确性的“晴雨表”
在多因子检测中,回收率(Recovery)是评估检测方法准确性的重要指标。它通过模拟实际检测场景,向样品中添加已知量的标准物质,然后检测其回收情况,从而反映检测方法的准确性。回收率的计算公式为: 回收率= (加入量测得值−本底值)/加入量×100%。
其中,测得值是指加入标准物质后样品的检测结果;本底值是指未加入标准物质时样品的检测结果;加入量是指人为添加的标准物质的量。如下图所示,不同加入量下的回收率均在70-130%之间,说明拟合结果在不同浓度水平下均具有良好的准确性。
理想的回收率应接近100%。它能够帮助研究人员评估检测方法是否能够准确反映样品中目标物质的真实含量。然而,回收率的测定需要严格控制实验条件,且可能受到样品基质效应、操作误差、仪器性能等多种因素的影响。因此,在多因子检测中,回收率通常需要结合其他指标(如线性范围、R2)综合评估检测方法的性能。
3.多板数据质量控制:QC的应用与重要性
在多因子检测技术中,尤其是在同一技术平台下使用同一试剂盒进行多板数据检测时,确保不同板间实验结果的准确性和可比性至关重要。LabEx作为严格规范的蛋白检测服务平台,通过设置QC(质量控制)样本,为每一板的结果提供了严格的验证机制。这些QC样本通常为试剂盒中的标准品,通过检验不同标准品之间检测浓度值的变异系数(CV值),能够有效评估实验操作的重复性和稳定性,从而减少因机器或技术操作带来的误差。
此外,QC样本的结果还可用于对实验数据进行校正,消除批次间差异,进而提高数据的可比性。然而,对于长时间间隔的实验,仅依赖QC样本难以保证不同批次间数据的可用性。这需要结合一系列更为复杂的数据校正方法,相关内容将在后续篇章中详细展开。
总而言之,在多因子检测中,追求卓越的质量控制是实现数据标准化的关键。通过对变异系数(CV)、回收率(Recovery)等关键指标的严格把控,结合QC样本的有效应用,我们能够系统性地评估和优化检测方法的精准度与准确性。这不仅确保了批次间及实验室间的数据互通与结果可比,更为科学研究与临床诊断奠定了坚实可靠的数据基础。如此,推动生命科学的持续进步与广泛应用。
乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家,自2018年成立以来,乐备实不断寻求突破,公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、蛋白芯片、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个,建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
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