在生物药物治疗中，ADA（抗药物抗体）的检测是确保药物安全性和疗效的关键环节。ADA的产生不仅会影响药物的效果，还可能引发严重的过敏反应和毒性反应。因此，准确、高效的ADA检测技术至关重要。

上期我们介绍了什么是ADA？免疫原性的小怪兽，大家都怕它吗？

今天，我们将深入探讨两种常用的ADA检测技术：酶联免疫吸附测定（ELISA）和多因子检测系统（MSD）。

一、技术原理

1、ELISA

技术原理

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原-抗体特异性结合的免疫分析技术。其基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上，加入待测样本中的抗体或抗原，通过特异性结合形成抗原-抗体复合物。随后，加入酶标记的二抗，通过酶促反应显色，最终通过光吸收值（OD值）来定量检测样本中的抗体或抗原浓度。

 ELISA技术原理示意图（上图图注）

ELISA技术的优点是操作简便、成本较低、特异性强，适合大规模样本的检测。然而，ELISA的灵敏度相对较低，对于低浓度的ADA检测可能不够敏感。

2、MSD技术

技术原理

MSD（Meso Scale Discovery）是一种基于电化学发光（ECL）的多因子检测技术。其基本原理是将抗原或抗体固定在电极表面，加入待测样本中的抗体或抗原，通过特异性结合形成抗原-抗体复合物。随后，加入标记有电化学发光标记物的二抗，通过电化学反应产生发光信号，最终通过发光强度来定量检测样本中的抗体或抗原浓度。

MSD原理示意图（上图图注）

MSD技术的优点是灵敏度高、动态范围宽、可同时检测多个指标，适合低浓度样本的检测。然而，MSD技术的设备成本较高，操作相对复杂，适合高通量和高灵敏度的检测需求。

ELISA与MSD的比较

二、方法学的开发和验证---MSD技术在ADA检测中的应用

免疫原性检测相关指南（上图图注）

免疫原性检测-CDE, NMPA 药物免疫原性研究技术指导原则 (2021) （上图图注）

方法学开发方案&推荐验证参数

根据以上收集到的“指南”与“开发方案与参数”，那在实际的应用中该当如何呢？
下面将以MSD技术为例，来分享ADA检测的原理模型有哪些、检测流程是怎么样的。

MSD-免疫原性检测技术原理

免疫原性测定检测流程

在ADA检测中的应用

具体步骤如下：

（1）包被：将治疗性抗体固定在电极表面。

（2）孵育：加入待测样本，孵育一段时间，使样本中的ADA与包被的治疗性抗体结合。

（3）洗涤：去除未结合的成分，确保只有特异性结合的ADA保留在电极表面。

（4）检测：加入标记有电化学发光标记物的二抗，孵育后通过电化学反应产生发光信号，通过发光强度定量检测ADA的浓度。

附：免疫原性方法学开发与验证-MSD核心试剂、耗材及设备- 

1. 核心试剂耗材

（1）96孔石墨烯电极板（空板、高结合力板、链霉亲和素包被板、多点板等，用于不同开发实验）

（2）读板液

（3）封闭液

（4）电化学发光标记物

2. 核心仪器设备

（1）MSD仪器（S120、S600）

（2）摇板机 (300-1000 rpm)

（3）分光光度计(Nanodrop)

（4）离心机

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