众所周知,我们迷人的老祖宗:秦始皇千古一策【车同轨】【书同文】【统一度量衡】,为中华民族史前史后的发展奠定了坚实基础。
在现代医学检测领域,我们有时也面临着类似的问题——使用不同的检测方法学得到的结果,由于没有统一的标准,难以直接比较。
今天我们来讨论下蛋白检测技术统一“度量衡”的第一步:
蛋白检测技术是现代生物医学研究的常见方法,它可在单一样本中高通量精准检测多种生物标志物。同时具有高效且节约样本的优势,输出海量数据,助力新生物标志物发现与验证,是剖析复杂生物系统的有力手段。
(Stop一下,如果您对蛋白检测不甚了解,这里小备推荐阅读:细胞因子检测全解析,这13个宝藏技术你必须知道)
然而,不同检测方法因各有其原理与试剂,各显神通的同时也带来挑战。一方面,检测信号值可能因批次效应而波动;另一方面,不同厂家、批次试剂盒的标准品浓度各异,导致最终浓度结果难以直观比较,就像战国初期各国没有统一的长度标准,矛盾频发亦不利于国家发展。
具体来说,每份标准品都有明确的浓度值。实验中,标准品被梯度稀释,产生一系列信号值。通过信号值与对应浓度的关系,构建一条标准曲线,它如同信号与浓度之间的桥梁。借助这条曲线,可以将待测样本的信号值转换为具体的浓度数值。
但不同厂家、不同批次的标准品浓度缺乏统一标准,会导致标准曲线的拟合出现差异,进而影响最终的检测浓度。
为解决标准品不同所带来的影响,目前存在两个解决方案。一方面,寻找统一的“度量衡”,即国际标准品,这需要厂家在试剂盒研发初期就进行相关工作。
如上图所示,MSD产品中部分标准品在出厂前已与国际标准品对标,有了对应的换算系数,通过换算可消除批次间标准品浓度的差异。
另一方面,在实验设计之初,使用同一批次的试剂盒,可以保证同一批次每板检测数据的严谨性及准确性。
而为了保证检测数据的准确,其中两个关键指标尤为关键:
1. 变异系数(CV,CV=SD(x)/Mean(x)×100%),它是衡量检测结果重复性和稳定性的核心指标。在实验中,我们会对每个标准品梯度浓度复孔计算CV值,通过这种方式,我们可以确保实验数据的稳定性和合理性,从而为构建准确的标准曲线奠定坚实基础。
2. 回收率(Recovery,Recovery=(测得量-本底值)/加入量×100%),这一指标反映了实验过程中目标物质被准确识别和测量的能力。具体而言,我们通过计算预设浓度与实际测得浓度之间的偏差来量化检测方法的准确性。
LabEx实验室对标准曲线的拟合数据进行了精心设计,并基于CV、Recovery对标准品进行质控,通过这种严谨的实验设计,进而确保每一步骤的准确性,从而提高最终检测结果的可靠性。(如下图所示)
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