摘要

TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，时间分辨荧光共振能量转移）是一种用于研究分子间相互作用的生物物理技术。其中一个荧光分子（供体）在吸收光能后，可以将激发能量非放射性地传递给另一个分子（受体），如果受体在空间上足够接近供体（通常在1-10纳米范围内）。这种能量转移的效率与供体和受体之间的距离的六次方成反比，因此可以用来研究分子间的接近程度和相互作用。利用这项技术可以高效筛选靶向蛋白/蛋白受体抑制剂、筛选靶向蛋白降解的PROTAC分子、筛选KRAS/cRAF小分子阻断剂等。

图：THUNDER TM TR-FRET技术原理图

第一部分 细胞因子/细胞因子受体阻断剂筛选

细胞因子抑制剂类药物在医学界的应用和研究领域显示出广泛的潜力，特别是在治疗自身免疫性疾病、肿瘤、感染和其他多种疾病方面。

在自身免疫性疾病治疗方向， IL-2和IFN是治疗自身免疫性疾病的重要细胞因子抑制剂。IL-2已被广泛研究用于治疗多种自身免疫性疾病，尽管其开发受到挑战，但仍然是治疗这些疾病的关键药物之一。IFN-α主要用于治疗病毒性感染和肿瘤，其对慢性活动性肝炎和毛细胞白血病的疗效较为显著。最近，针对B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制剂（如贝利尤单抗）已在中国获得上市批准，另有20多种药物正在积极开发中，用于治疗类风湿关节炎等其他自身免疫性疾病。IL-1受体拮抗剂在治疗炎症和自身免疫性疾病方面显示出较好的疗效。

在肿瘤治疗方向，抑制肿瘤细胞中的特定细胞因子信号通路是当前肿瘤治疗的策略之一。例如，抗TNF单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用，以及利用PD-L1/IL-15 Immunocytokines治疗肿瘤的新型疗法正在发展中。小分子蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂，这类药物能够抑制细胞内的信号传导，用于癌症治疗，特别是通过抑制关键的信号分子如STAT3来阻断肿瘤信号通路。另外，CDK4/6抑制剂在乳腺癌治疗中显示出潜力，已有三种药物获批用于治疗激素受体阳性乳腺癌患者。

感染和炎症性疾病治疗方向，抑制炎症反应的细胞因子产生和受体结合是治疗感染性休克和自身免疫性疾病的有效方法。

细胞因子抑制剂类药物在多个疾病的治疗中显示出显著疗效，但也面临着副作用大、耐药等挑战。随着新技术和新药物的开发，未来可能会有更多选择和更好的疗效。

TR-FRET技术用于筛选细胞因子阻断剂原理模型一

如图所示，Tag1 与 Tag2 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于Tag1 与 Tag2 结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号

与 Tag1 与 Tag2相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

TR-FRET技术用于筛选细胞因子阻断剂原理模型二

如图所示，Tag1 与 Tag2 之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Accepter 标记的 Tag2 蛋白（TR-FRET受体）检测的。由于Tag1 与 Tag2 结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与 Tag1 与 Tag2相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

数据展示

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。

1. TNF-a & TNFR1 Binding
2. TNF-a & TNFR2
3. IL-2 & IL-2R
4. IL-3 & IL-3R
5. IL-4 & IL-4R
6. IL-17 & IL-17RA

References:

1.Small Molecule Protein–Protein Interaction Inhibitors as CNS Therapeutic Agents: Current Progress and Future Hurdles. Richard R Neubig; Levi L Blazer

2.Effects of 17-DMAG on non-small cell lung cancer cell lines A549 and H1975 being resistant to EGFR-TKI. Zhao, Lei; Cao, Fumin

3.Latest Overview of the Cyclin-Dependent Kinases 4/6 Inhibitors in Breast Cancer: The Past, the Present and the Future. Zhang, Wei; Chen, Xiu; Xu, Weilin ; et al.

4.Proteolysis targeting chimera (PROTAC) in drug discovery paradigm: Recent progress and future challenges,Zeng, Shenxin; Huang, Wenhai; Liyan Cheng; et al.

5.Overcoming Cancer Drug Resistance Utilizing PROTAC Technology. Zheng, Guangrong; Burke, Matthew R; Smith, Alexis R

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