还在为检测细胞因子样本制备发愁？样本量少怎么办？今天一篇文章帮你搞定！

为什么要重视样本前处理？

多因子检测灵敏度高，但样本中的杂质、不正确的抗凝剂、反复冻融等都可能影响数据准确性。规范的样本处理是拿到可靠数据的第一步。

常见样本类型及特点：

面对众多样本，怎么处理呢？

一起来看看多因子检测中常见样本类型的采集处理离心保存运输怎么办吧~

体液样本

血清

采集方法：使用无抗凝剂的普通真空管（红色帽），采集静脉血5-10mL，轻轻颠倒试管3-5次，避免剧烈震荡导致溶血。

处理步骤：

1.室温静置30-45分钟，让血液自然凝固；若环境温度较低，可4℃静置2小时。

2.离心后转移上清至干净试管，若存在沉淀，需二次离心或过滤。

离心条件：

1.首次离心：4℃，3000g，20分钟，小心吸取上层血清（避免触碰中间白细胞层和下层红细胞）。

2.二次离心（可选）：若血清中仍有沉淀，4℃，3000g重复离心20分钟，或用0.2-0.8μm滤膜过滤。

保存要求：

当天检测：4℃冷藏；短期保存：20℃冷冻；

长期保存：等量分装，每管体积根据实验需求，通常50-200μL，80℃保存，严禁反复冻融。

适用场景：炎症因子检测、自身抗体筛查、肿瘤标志物分析，适用于疾病诊断、预后评估。

血浆

采集方法：使用抗凝管（根据需求选择：EDTA-K2管（紫色帽）、肝素锂管（绿色帽）、柠檬酸钠管（蓝色帽）），采集静脉血5-10mL，立即轻轻颠倒试管8-10次，确保抗凝剂与血液充分混合。

处理步骤：采集后1小时内处理，避免室温放置过久。

离心条件：

EDTA/肝素抗凝血浆：4℃，3000g，15分钟，吸取上层血浆。

柠檬酸钠抗凝血浆（如凝血功能相关检测）：4℃，2000g，15分钟。

若存在血小板残留，可4℃，3000g二次离心10分钟。

保存要求：

当天检测：4℃冷藏；短期保存：20℃冷冻；

长期保存：等量分装，每管体积根据实验需求，通常50-200μL，80℃保存，严禁反复冻融。

适用场景：凝血因子检测、血小板相关细胞因子、循环游离DNA分析，适用于血栓性疾病、血液病等研究。

细胞培养上清

采集方法：用无菌吸管吸取上清，体积根据培养瓶大小。

处理步骤：收集后1小时内处理，避免室温放置。

离心条件：4℃，3000g，10分钟，吸取上清。

保存要求：

当天检测：4℃冷藏；

长期保存：分装后80℃。

适用场景：细胞分泌的细胞因子、炎症介质检测，适用于药物刺激实验、细胞功能研究。

细胞/组织裂解液样本

采集方法：手术或活检获取组织后，立即用预冷的PBS冲洗2-3次，去除血液和杂质，避免挤压或损伤组织。

处理步骤：

剪成小块约3×3mm，取适量组织，加入预冷的裂解液，然后转移到冰上的组织研磨器内，研磨至匀浆状。

注：裂解液（推荐abs9225）中需加入蛋白酶抑制剂（推荐abs9161）

离心条件：4℃，13000g，10分钟，吸取上清，建议两次离心。

保存要求：

新鲜组织：采集后30分钟内处理；若无法立即处理，80℃冷冻或液氮长期保存。

组织匀浆：分装后80℃保存，避免反复冻融。

适用场景：组织内细胞因子、蛋白标志物检测，适用于肿瘤微环境研究、疾病机制分析。

脑脊液（CSF）

采集方法：腰椎穿刺术采集，收集于无菌离心管，体积1-5mL，避免混入血液。

处理步骤：采集后立即处理1小时内，避免室温放置。

离心条件：4℃，1500g，10分钟，吸取上清。

保存要求：

当天检测：4℃冷藏；

长期保存：分装后80℃，避免反复冻融。

适用场景：中枢神经系统疾病的细胞因子检测，适用于神经炎症、脑病研究。

肺泡灌洗液

采集方法：使用注射器在灌洗的器官注入无菌生理盐水，反复冲洗3-5次，随后回收灌洗液，收集于无菌离心管中，全程保持样本在冰上。灌洗液的体积可以根据具体情况进行调整，例如:大鼠可以每个5ml均重复注入-回抽操作3次,15ml约可回收9-12ml灌洗液（总回收率60-75%）。

处理步骤：​采集后 1 小时内进行处理，若灌洗液中含有较多黏液，可先用无菌纱布过滤，或加入适量 DNA 酶室温孵育 10 分钟以降低黏稠度。离心后若上清仍有少量杂质，可再次离心或过滤。​

离心条件：

​首次离心：4℃，1500g，10分钟，小心吸取上层清澈的灌洗液上清。​

二次离心（可选）：若上清中仍有细小颗粒或细胞碎片，4℃，3000g 离心15分钟，收集上清。​

保存要求：​

当天检测：4℃冷藏；

长期保存：等量分装，-80℃保存；严禁反复冻融。​

适用场景：肺部炎症因子检测、肺部感染病原体相关标志物分析、肺泡表面活性物质成分测定等，适用于肺炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化、肺癌等肺部疾病的研究与诊断。​

尿液

采集方法：

随机尿：清洁容器收集中段尿，体积5-10mL。

晨尿：采集晨起第一次尿，体积10-20mL。

处理步骤：采集后1小时内处理，若无法立即处理，4℃暂存。

离心条件：室温或4℃，3000g，10分钟，吸取上清。

保存要求：

当天检测：4℃冷藏；

长期保存：分装后80℃；若样本含大量盐类，建议20℃短期保存。

适用场景：肾脏疾病标志物、代谢物检测、药物代谢产物分析，适用于肾病、泌尿系统疾病研究。

关节滑膜液、痰液、唾液、鼻腔灌洗液等：

用无菌管收集样品，2-8℃下以3000 x g离心10分钟。收集上清液，可立即检测，或分装冻存于-80℃。尽量减少冻融循环。

鼻腔分泌物、泪液、子宫腔液、阴道分泌物等：

收取样本后将棉签放入试管，立即用等量生理盐水或样本稀释液完全冲洗棉签，离心取上清，分装后-80℃冻存。

🔅小贴士→样本保存与运输

避免反复冻融，样本处理之后可分装密封保存。保存条件：长期保存请置于-80℃，运输时使用干冰。

样本处理视频链接：样本处理视频点击

遇到微量样本想要测多个指标怎么办？多因子检测来帮忙

目前主流的多因子检测技术平台包括：

MSD平台：基于电化学发光原理，具有高灵敏度、节省样本用量、高兼容度、信号稳定、实验流程简便等优点。

Luminex平台：结合了荧光编码微球技术、激光分析技术等，实现高通量、高速度、低成本的蛋白质和核酸检测，一次可检测100个指标。

CBA平台：基于流式细胞检测系统，能够同时对单个样品中的多个指标进行检测，节省样本量，提高灵敏度和重复性。

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

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