样本准备
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样本类型 |
预处理方式 |
厚度要求 |
运输方式 |
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新鲜组织 |
4 % 多聚甲醛固定 12–24 h（根据组织大小调整），梯度脱水后石蜡包埋 |
石蜡块切片 5 µm |
冰袋 2–8 °C 运输 |
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石蜡组织块 |
常规包埋完成即可；请在包埋盒侧壁标明“组织方向”（如肿瘤长轴） |
切片时 5 µm |
冰袋 2–8 °C 运输 |
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石蜡切片 |
防脱载玻片捞片后 37 °C 过夜烘干，60 °C 烘片 30 min；按分组编号，装入玻片盒 |
5 µm |
玻片盒封口、防震泡沫，室温运输 |
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冰冻组织 |
4 % 多聚甲醛固定 30 min → PBS 洗 2 次 → OCT 包埋，−80 °C 速冻 |
冰切 8 µm |
干冰运输（−80 °C，≥5 kg） |
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冰冻切片 |
OCT 冰切后 37 °C 烘干 1 h；按分组编号，装入玻片盒 |
8 µm |
玻片盒封口、防震泡沫，干冰运输 |
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TMA 切片 |
同石蜡切片；核心直径 1.5 mm，间距 ≥0.2 mm |
4–5 µm |
室温防震运输 |
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穿刺组织 |
4 % 多聚甲醛固定 30 min → OCT 包埋 |
冰切 5–6 µm |
干冰运输 |
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类器官 |
30 % Matrigel dome → 4 % 多聚甲醛 30 min → OCT 包埋 |
冰切 5–6 µm |
干冰运输 |
FFPE样本石蜡样本：
1.组织固定要求（FFPE 蜡块与FFPE 切片都适用）
1)组织离体时间：缺血离体时间不宜超过1h，组织块离体后应尽快固定；
2)组织固定液：推荐10%NBF 或4%PFA，10%NBF 穿透力强，4%PFA 穿透力弱一些；
3)固定时间：根据组织块大小而不同，0.5cm 直径组织块一般18-24h。固定时间不宜太长，例如几天，几周，甚至几个月。
2.FFPE 蜡块要求
1)组织固定需符合1 中的要求；
2)存放条件：将蜡块放入干燥器中，保持干燥环境，室温保存；
3)蜡块年龄：小于3 年的蜡块没有问题，大于3年蜡块3年以上DV200>30%即可。
3.FFPE 样本石蜡切片要求
1)组织固定需符合1 中的要求。
2)蜡块的保存与年龄需符合2 中的要求。
3)蜡块切片要求：由于蜡块表面的空气氧化，避免用蜡块最表面切片，选用中部组织，样本需为切片14 天内的样本。
4)切片厚度：推荐5μm，越薄越好。
5)组织切片位置：组织切片需位于载玻片中央（下图绿色矩形区域，左边为载玻片磨砂区域）。
6)切片存放条件：将切片放入干燥器中，保持干燥环境，放置4℃保存及运输。
7)切片有效时间：推荐使用新鲜切片，保存时间需小于14 天。
FF 样本（冰冻样本）要求：
1.FF 样本块要求
1)组织块离体后应立即用液氮或者异戊烷速冻。
2)速冻后的组织块需用OCT 包埋剂包埋。
3)包埋后的组织块需在-80℃保存。
2.FF 样本切片要求
1)FF 切片需要冷冻切片机上完成。
2)切片后应立即贴片至载玻片中。
3)切片厚度：推荐5μm，越薄越好。
4)组织切片位置：组织切片需位于载玻片中央（同上图）。
5)切片后，FF 组织块切口处用OCT 包埋剂覆盖，防止组织块干燥。
6)切片有效时间：我们推荐使用新鲜切片，-80℃保存时间需小于14 天。
TMA样本要求
1)核心直径 1.5 mm，密度 50–100 cores/片；
2)核心间距 ≥0.2 mm，防激光串扰。
3)需额外 1 张 H&E 预扫，方便 ROI 区分命名。
防脱片小技巧：
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原因 |
解决办法 |
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脱钙过度或不足 |
使用温和的脱钙液（如EDTA），控制脱钙时间，避免组织结构破坏。 |
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组织固定不充分 |
脱钙前必须充分固定（如10%中性福尔马林固定24–48小时），以增强组织稳定性 |
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切片过厚或刀痕多 |
控制切片厚度（一般4–5 μm），使用锋利刀片，避免机械损伤。 |
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贴片不牢 |
使用粘附性强的玻片，增强组织附着力。 |
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染色过程剧烈 |
避免高温、强酸强碱染色步骤，使用温和染色流程。EDTA或柠檬酸60-80℃水浴修复30-45分钟 |
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烤片温度或时间不足 |
切片后应在60°C下烤片至少1小时，确保组织牢固贴附。 |
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组织块过大或形态不规则 |
骨组织块应控制在2–3 mm厚度，便于脱钙和后续处理 |
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
