为什么必须“多因子”？

😔传统 ELISA：1 孔 1 指标，耗样 50–100 µL，96孔板做10个指标 → 样本直接见底！

😃多因子检测：1 孔 10–96 指标，耗样 ≤50 µL，数据两小时内到手，纵向队列研究“真香”！

蛋白检测方法怎么选？6大平台一次看懂，省钱、省时、省样本！

一、酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA是基础研究和临床中对单一分析物进行定量分析的重要技术。目前商用的细胞因子Elisa试剂盒大多采用双抗体夹心法，能够高特异性检测复杂样品中的分析物，可广泛用于多个物种和靶标。

特点：

（1）特异性高、灵敏度高、操作简单方便、酶标仪、成本相对较低。

（2）一次实验仅能检测一个靶标，若需在同一样品中检测多个靶标。

（3）操作多个Elisa较为复杂，时间花费长，且需要的样本量较大，后面提到的多指标分析技术可克服这些问题。

检测仪器平台：酶标仪

反应容器：96或384孔板

可检测种属：人、小鼠、大鼠、非人灵长类、猪、狗、牛、羊等多个种属

可检测样本类型：血清、血浆、细胞培养上清等，不同的试剂盒适配的样本类型不同。

所需样本体积：50-100 µL

单次实验可检测指标数：1

灵敏度：pg/ml

线性范围：2-3 logs，常规ELISA线性范围在10pg/ml-1000pg/ml，超敏试剂盒则为0.5-10pg/ml，不同试剂盒线性范围不同。

二、Luminex（液相悬浮芯片）

原理：

通过使用两种不同的染料不同比例，产生多达100种不同颜色的微球。每种颜色的微球都具有独特的编码，并且只固定包被一种抗体，实现了编码与靶标的一一对应。将多种不同编码的微球混合在一起，放入同一个孔中。加入样本和检测抗体后，即可在一个样本中同时检测多种蛋白质，从而实现高通量检测。

特点：

（1）节省样本体积，不管检测指标数量有多少，每例样本都仅需50 uL。

（2）指标‌高通量‌，单次检测可实现‌96个指标的检测‌‌。

（3）灵敏度高‌，数据重复性高‌。

（4）指标灵活组合‌，个性化定制，支持炎症因子、趋化因子、血管类多类型指标定制。满足筛选验证应用多领域研究‌。

样本种属：人、小鼠、大鼠、非人灵长类、犬、猪、马、牛、鸡、羊、猫

可检测样本类型：细胞上清、血清、血浆、乳汁、尿液、组织裂解液、唾液、房水、脑脊液、支气管肺泡灌洗液等多种样本

所需样本体积：25-50μL

灵敏度：pg/ml

线性范围：3.5- 5.5 logs

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三、MSD（超敏电化学发光技术）

原理

96孔板底部集成碳素电极，加入样本后，目标蛋白被捕获，使用Sulfo-tagTM标记物，形成“电极抗体抗原抗体SULFOTAG”夹心。通电后，电化学作用激发Sulf-tagTM标记物发出强光。由于其独特的电化学发光原理，可将许多非特异信号予以排除，受样本性质的影响更小，对于各类生物学样本的兼容度高。

特点：

（1）节省样本，10-50ul以内完成10指标。

（2）高灵敏、宽线性，数据重复性高，极适合低丰度生物标志物（如神经丝蛋白、tau）。

（3）指标灵活组合‌，可做开发型实验。

（4）MSD已成为Aβ38、40、42等多因子检测的金标准，另有α-Synuclein、APP、NFL、NFH、Tau、VEGF-A、GFAP等在内的多种神经相关指标的检测产品。

检测种属：人、小鼠、大鼠、非人灵长类

可检测样本类型：细胞上清、血清、血浆、乳汁、尿液、组织裂解液、唾液、房水、脑脊液、支气管肺泡灌洗液等多种样本

所需样本体积：10-50μL

灵敏度：可达fg/ml

线性范围：3–6 logs，线性范围更宽

四、Antibody Array（抗体芯片/固相芯片）

原理

抗体芯片技术利用特异性抗体，将目标蛋白从复杂的生物样本中捕获并固定在芯片上。通过洗脱非特异性结合的蛋白，对目标蛋白特异性检测。

特点：

（1）与传统的Western Blot相比，抗体芯片效率更高：

（2）节省样本，样本量少，100ul可检测几十个指标！

（3）适用范围广，20余种研究领域全覆盖，科研从此不再受限！

（4）高灵敏度：灵敏度高达pg/ml，科研数据更精准！

检测种属：人、小鼠、大鼠

可检测样本：细胞培养上清、细胞组织裂解液、血清、血浆等

样本体积：定量芯片50-100ul

灵敏度：pg/ml

五、PCR Array（信号通路基因表达芯片）

原理：

96孔板每孔预置特定基因引物探针（SYBR或TaqMan）；加入cDNA后，qPCR仪同时扩增90–380个基因，通过ΔΔCt法或标准曲线，获得各基因相对/绝对表达量。

特点：

（1）转录水平“多因子”，与蛋白结果互补；

（2）通路聚焦（炎症小体、肿瘤免疫、代谢酶）。

（3）不受蛋白分泌/降解动力学影响，适合机制上游研究。

（4）仅测mRNA，需验证蛋白水平；RNA质量决定成败。

总RNA起始量10ng–2µg；

灵敏度可检测单拷贝；

动态范围6–7logs；CV<5%。

六、CBA（Cytometric Bead Array，流式微球阵列）

原理：

与前述Luminex类似，CBA也是基于微珠的检测方法。将微珠用不同荧光染料染色，每种特定荧光的微珠包被特定分析物的抗体。添加带有荧光素标记的检测抗体后，通过检测抗体的荧光强度来量化分析物，能同时读取多达10多种不同分析物。

特点：

（1）实验室已有流式即可上手，零硬件门槛。

（2）使用30–50µL样本，动态范围4logs，灵敏度10–20pg/mL；

（3）通量低于Luminex，Panel≤13；

（4）微球沉降快，需及时上机。

CBA的原理与实验流程

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