《神经元 PD-L1 抑制通过 PD-1/RFX1 轴介导的小胶质极化减弱缺血性中风损伤》

摘要：

背景与目的： PD-L1/PD-1 轴在 IS 中的作用仍存在争议，系统性 PD-1 或 PD-L1 敲除模型的结果存在矛盾。这些差异凸显了 PD-L1/PD-1 信号传导的复杂性，并凸显了探索其细胞特异性功能的必要性，尤其是在神经元和小胶质细胞中。神经元作为中枢神经系统的主要功能细胞，在调节局部免疫反应中起着关键作用，但它们对 IS 中 PD-L1/PD-1 信号的贡献尚不明确。此外，PD-L1/PD-1 与微胶质细胞极化的机制仍不明确。本研究探讨了针对神经元 PD-L1 的靶向抑制是否通过调节 PD-1/RFX1 轴并推动小胶质细胞向抗炎表型极化，从而缓解 IS 损伤。

方法： 在小鼠中进行中脑动脉阻塞（MCAO）以建模 IS。神经元 PD-L1 通过 AAV 选择性抑制。通过流式细胞术、免疫荧光、4D-FastDIA 蛋白质组学和 qPCR/ELISA 评估了小胶质细胞极化、PD-1 和 RFX1 表达以及神经炎症。体外研究建立了 PD-1 敲低 BV2 细胞和 RFX1 过表达模型，以验证机制相互作用。

结果： 神经元 PD-L1 抑制减少了梗塞体积，改善了脑血流，并缓解了缺血性卒中小鼠的神经功能障碍。小胶质 PD-1 表达显著下降，伴随表型从促炎状态转变为抗炎状态。RFX1 仅在小胶质细胞中表达，被下调并被鉴定为 PD-1 和小胶质极化的关键调控因子。体外实验中，RFX1 过度表达逆转了 PD-1 降序的抗炎效应，恢复了促炎细胞因子水平。关键是，神经元 PD-L1 的抑制保护了外周免疫细胞，避免了系统性免疫破坏。这些发现确立了 PD-1/RFX1 轴作为 IS 神经炎症中神经元-小胶质细胞交叉扰的核心介导者。

结论： 神经元 PD-L1 抑制通过调节 PD-1/RFX1 轴以促进抗炎小胶质细胞极化，从而减轻 IS 损伤。本研究揭示了一种新的神经元-小胶质细胞串扰机制，并强调 RFX1 作为 IS 治疗靶点。神经元特异性策略克服了系统性 PD-L1/PD-1 抑制的局限，提供了一种精确且临床上可转化的方法，以减轻神经炎症，同时保持外周免疫稳态。

关键词： PD-L1/PD-1 轴;RFX1;缺血性中风;小胶质细胞极化;神经炎症。

实验设计：

Luminex液体悬浮芯片测定法测定脑组织中细胞因子和趋化因子的水平。(n=5/组)。

AAV 组，是通过腺相关病毒（AAV）实现神经元特异性 PD-L1 敲低的实验组。

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