在呼吸系统研究中，样本质量 = 数据上限。
无论是多因子检测、炎症因子分析，还是机制研究，前处理一旦出问题，后面基本“全盘皆输”。

今天这篇，帮你把常见的四类样本——
痰液 / 灌洗液（BALF）/ 血清 / 血浆
从采集 → 处理 → 保存 → 避坑一次讲清楚！

一、痰液样本处理流程

痰液样本具有粘度高、成分复杂、易降解等特点，处理的核心在于充分裂解粘液并尽量减少蛋白降解。

1. 采集

受试者漱口后，采集深部咳出痰液，置于50 mL无菌离心管中。样本需在4℃条件下保存，并在2小时内完成处理。

2. 预处理

称量样本后，加入4倍体积的0.1%二硫苏糖醇（DTT，溶于PBS或生理盐水），充分混匀。DTT的作用是裂解粘液，提高后续检测的均一性。

3. 孵育

于37℃震荡孵育15分钟，每5分钟使用移液器吹打混匀一次。

4. 过滤与离心

使用48 μm尼龙网过滤后，于4℃条件下3000g离心10分钟，收集上清。

5. 分装与保存

上清分装后置于-80℃保存，避免反复冻融（不超过2次）。

注意事项：      

1. 建议加入PMSF或EDTA抑制蛋白降解

2. 必须采集深部痰液，避免唾液污染

3. 样本处理时间超过2小时会显著影响检测结果

二、灌洗液样本处理流程（BALF/鼻腔灌洗液等）

灌洗液样本背景干净、可控性强，是呼吸系统研究中常用样本类型。

1. 采集

使用PBS、生理盐水或Hank’s液作为灌洗缓冲液，在目标部位进行3–5次反复冲洗。
以大鼠为例，每次注入5 mL，重复3次，回收量约为9–12 mL（回收率60–75%）。

2. 一次离心（去细胞）

4℃，300g离心10分钟，去除细胞及大颗粒杂质。

3. 二次离心（去残留）

4℃，3000g离心10分钟，或10000g离心15分钟，以彻底去除残留杂质。

4. 分装与保存

将上清分装至EP管（每管100–300 μL），-80℃保存，避免反复冻融。

注意事项：

1. 全程需保持无菌操作

2. 灌洗液建议预冷至4℃，降低蛋白降解风险

3. 若样本浑浊，可增加过滤步骤后再离心

三、血清样本处理流程

血清样本是多因子检测中应用最广泛的类型之一，其关键在于避免溶血和保证分离充分。

1. 采集

使用不含抗凝剂的采血管采集血液。

2. 静置

4℃静置2小时，使血液充分凝固。过程中避免震动，防止溶血。

3. 离心

4℃，3000g离心20分钟，收集上清。

4. 二次离心或过滤

重复离心一次，或采用0.2–0.8 μm滤膜过滤，以去除残留血小板及杂质。

5. 分装与保存

当天检测：4℃保存

延后检测：等量分装后-80℃保存

注意事项：

1. 溶血会严重干扰检测结果

2. 强烈建议分装，避免反复冻融

3. 冻融次数控制在2次以内

四、血浆样本处理流程

血浆样本与血清的主要区别在于采集方式及是否使用抗凝剂，其处理流程总体类似，但需特别注意抗凝条件。

1. 采集

使用含抗凝剂的采血管，推荐使用EDTA抗凝管。

2. 混匀
采血后轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡。

3. 离心
4℃，3000g离心20分钟，收集上清。

4. 二次离心或过滤
重复离心或使用0.2–0.8 μm滤膜过滤，去除残留成分。

5. 分装与保存

短期：4℃保存

长期：-80℃分装保存

注意事项：

1. 抗凝剂类型会影响部分检测指标，需根据实验设计选择

2. 操作不当同样可能导致溶血

3. 血浆与血清数据不可直接混用

五、总结

不同样本类型在前处理过程中存在显著差异，其核心关注点如下：

乐备实（上海优宁维生物科技股份有限公司旗下全资子公司），是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

 
我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。