引言
支气管肺泡灌洗（BAL）又称液相活检，通过纤维支气管镜向肺段/亚肺段肺泡灌注无菌生理盐水并回收灌洗液，获得BALF样本。该样本直接反映肺泡微环境，离心上清可用于生化与免疫检测，沉淀适用于细胞形态、病原与分子分析，是下呼吸道感染诊断、预后评估、机制研究及新技术验证的关键载体。随着mNGS、单细胞测序、蛋白质组学等技术普及，BALF样本质量直接决定科研数据可靠性。当前国内BALF保藏缺乏统一标准，流程差异大、质控薄弱、生物安全风险突出，制约样本资源转化效率。本文依据相关专家共识与国家标准，整合全流程技术要点与应用进展，推动BALF样本规范化保藏与高质量利用。
1. BALF样本保藏关键技术要点
1.1 伦理与合规
BALF采集、存储与利用必须通过伦理审查，签署知情同意书，明确样本使用范围、数据隐私保护与生物安全责任，严格遵循《GB-T 37864-2019 生物样本库质量和能力通用要求》，保障患者权益与样本使用合法性。
1.2 生物安全管控
临床BALF多含致病微生物，存在职业暴露与传播风险。
- 开展生物安全风险评估，按等级落实防护装备穿戴与操作规范；
- 样本溢洒处理：含氯消毒液覆盖→75%酒精消毒→紫外线空气消毒→上报并重新取样；
- 医疗废物与废液经含氯消毒液处理后合规销毁，全程闭环管理。
1.3 样本采集标准
- 回收率：单肺段＞40%，肺下叶＞30%；
- 杂质控制：红细胞＜10%，上皮细胞＜5%，避免血液污染；
- 采集量：成人≥10 mL，儿童≥3 mL；
- 容器选择：病原学用无菌容器，细胞学用硅化塑料/涂硅玻璃容器，减少细胞黏附；
- 临时保存：2 h内送检，超时4 ℃暂存≤24 h。
1.4 转运与交接
- 转运箱75%酒精消毒，防止交叉污染；
- 入库核对姓名、ID、灌洗部位、采集时间、容器完整性；
- 拒收标识不清、量不足样本，不合格样本让步接收需记录并沟通临床。
1.5 制备与存储
- 离心条件：4 ℃、500×g、10 min；
- 上清分装冻存管，-80 ℃长期保存；
- 沉淀处理：加冻存液-80 ℃保存；或10%中性福尔马林固定制备细胞蜡块；亦可制备涂片、电镜切片分类存储。
1.6 质量评价
- 外观：无色透明、无溶血、无杂质；异常提示感染、出血、肺泡蛋白沉积症等；
- 细胞质控：自动细胞计数仪检测总细胞数、有核细胞数、存活率、结团率、碎片率，满足测序与流式要求；
- 分子/蛋白质控：上清纯度、活性达标，沉淀细胞状态良好。
2. BALF在临床科研中的核心应用
2.1 病原学分析
BALF是下呼吸道感染病原检测金标准样本，mNGS广谱筛查优势显著：
- 无需预设靶点，一次性检出细菌、真菌、病毒、寄生虫等；
- 疑难感染、混合感染、免疫低下患者感染溯源价值极高；
- 对比肺穿刺组织，BALF病原检出率更高、创伤更小、可重复性强。
2.2 病理学分析
细胞蜡块技术实现BALF样本长期保存与回溯研究：
- 沉淀固定、脱水、包埋后可连续切片，用于特殊染色、免疫组化、FISH、电镜；
- 新冠患者BALF细胞蜡块成功揭示肺部病理特征，为机制研究提供关键依据；
- 肺泡蛋白沉积症等疾病有明确细胞学诊断共识，BALF形态学特征可辅助确诊。
2.3 蛋白质组学分析
BALF蛋白质组覆盖肺泡微环境全部可溶性成分：
- 质谱技术筛选肺纤维化、慢阻肺等疾病特异性蛋白标志物；
- 联合单细胞转录组解析蛋白细胞来源，构建疾病预测模型；
- 优化样本制备流程，实现小体积样本深度定量分析，支撑临床转化。
2.4 流式细胞与免疫分析
免疫细胞组分与细胞因子谱反映肺部免疫状态：
- 中性粒细胞升高提示感染，淋巴细胞升高见于结节病、放射性肺炎；
- IL-17A、APACHEⅡ评分可独立预测重症肺炎预后；
- 淋巴细胞亚群分析助力肺部肿瘤、间质性肺病鉴别诊断。
3. 现存挑战与展望
3.1 主要挑战
- 保藏流程缺乏统一共识，多中心数据可比性差；
- 采集、灌洗量、转运等环节影响样本一致性，质控体系不完善；
- 高丰度蛋白干扰、细胞降解、核酸损失制约组学技术应用；
- 生物安全与样本溯源管理仍有薄弱环节。
3.2 未来方向
- 制定全国统一BALF样本保藏指南与质控标准；
- 建立多学科协作样本库，整合临床、影像、组学数据；
- 推进自动化制备、低温冷链、数字溯源一体化平台；
- 结合AI与多组学挖掘新型标志物，支撑呼吸道疾病精准诊疗。
4. 结论
BALF是连接临床与科研的核心生物资源，规范化保藏是实现其价值的前提。从伦理、生物安全、采集到存储、质控的全流程标准化，可显著提升样本质量与科研产出。随着技术迭代与流程完善，BALF将在下呼吸道感染、间质性肺病、肺部肿瘤等领域持续发挥关键作用，为精准医学与转化研究提供重要支撑。
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