一.样本&试剂寄送要求

二．贴壁细胞制备Protocol

1、在超净台内，使用75%乙醇擦拭外包装铝箔袋
2、拆开铝箔袋，取出内置器皿后，用尖镊将内置爬片取出放入所用培养板或培养皿内，
3、用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量）
4、种植细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。
5、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可。
6、使用细胞爬片时，（比如在6孔板钟放入爬片，6孔板的孔底面积往往比爬片面积多出一部分，加细胞悬液时，常常就是细胞铺满整个孔底，有时，细胞生长边集现象，就是靠近壁边缘细胞密度要高一些，这样处于中央细胞爬片上的细胞数量相对较少），比较好的做法是，将爬片放入孔内后，加细胞悬液时，只滴到爬片上，一直滴到液体布满整个爬片，但又不易溢出爬片边缘，放到培养箱里，等细胞贴壁后，取出，再滴加培养基布满整个孔底，继续培养，这样爬片上的细胞生长的密度就会很集中。
7、细胞放到爬片上，之后加任何试剂，都应沿培养板板壁少量一点点倒入液体，直到细胞被液体淹没，尽量不要把细胞冲到细胞爬片以外！
8、作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。如果要做诸如24h，48h，72h等这样时间点的实验的话，将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着继续培养。
9、细胞爬片，有多层包装，在超净台无菌状态下打开包装，未用完的爬片按照原先包装方式再包装起来即可。
10、爬片表面带有正电荷，请勿用手触摸，以免效果不佳！

三．悬浮细胞制备Protocol

取悬浮细胞液，1500-3000rpm离心5min，离心管底部能看到白色细胞团，弃上清；PBS清洗两遍，离心收集清洗好的细胞，弃上清；加入固定液，重悬，室温固定15-20min。

四．常见细胞容器对应细胞培养量及抗体体积

五．细胞样本关键注意事项

1、爬片消毒：必须彻底，75% 酒精消毒后需用 PBS 充分洗涤，避免酒精残留导致细胞死亡

2、固定：避免使用甲醇 - 丙酮混合液固定，适合膜蛋白但易使细胞皱缩，但会破坏脂质和膜结构。固定剂首选4%多聚甲醛，适合膜蛋白和大部分胞内蛋白，但可能掩盖磷酸化表位，固定后务必PBS洗3次（每次5分钟），彻底去除残留固定剂。

3、细胞吸附：多聚赖氨酸包被不充分或细胞静置时间不足会导致细胞脱落，若细胞吸附效果差，可延长静置时间至 45min，或提高细胞浓度。

4、细胞密度控制：不同细胞系的生长速度和贴壁能力差异较大，建议细胞在爬片上生长至 50%～70%汇合度，密度过高会导致细胞重叠，不便于清晰观察单个细胞的形态和结构影响后续染色观察；密度过低则细胞数量不足，实验结果不稳定。

5、对照设置：设置阴性对照，排除非特异性染色干扰。

6、制备细胞样本的时候建议一个组别多送几个样本，实验前都会观察选取细胞状态好的使用。

六．孔板耗材推荐（优选本公司产品，其他耗材实验端不指定品牌）

1.多聚-D-赖氨酸包被细胞培养板（细胞贴壁速度更快，贴壁更牢）

如：细胞爬片（12孔板，直径20mm，圆形）

2.共聚焦爬片（防止运输过程中爬片移动）

3.腔室载玻片

如：腔室载玻片（1格，TC处理，无菌无酶）

乐备实（上海优宁维生物科技股份有限公司旗下全资子公司），是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

 
我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。