一、目的

规范组织芯片（Tissue Microarray, TMA）送样指南，保证阵列位点完整、组织形态完好、抗原保存稳定，适用于后续 IHC、IF、PLA、原位杂交和 Nanostring DSP等实验。

二、适用范围

临床手术标本、动物组织福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本的组织芯片制备。

三、组织固定要求

1) 组织离体时间不宜超过 30min，应尽快固定；

修剪组织为标准大小：1cm×1cm×0.2～0.3cm，最大极限组织尺寸不超过：1.5cm×1.5cm×0.3cm，厚度不超过3mm，不小于1mm，过厚的组织块会导致固定和脱水不充分，影响后续切片质量，过薄的组织易造成脱水浸蜡过度、组织发脆，打孔取芯时易碎裂打穿，修块及切片中易缺失靶组织、位点空洞。

2) 肿瘤样本：必须包含癌区、癌旁正常组织、交界区，避开大片坏死、出血、钙化区域,剔除缝线异物、严重脂肪空泡、挤压撕裂区域。尽量平整切面，不要褶皱、卷曲、挤压撕裂。

3) 组织固定液：推荐 10%NBF 或 4%PFA，10%NBF 穿透力强，4%PFA 穿透力弱一些；固定液体积是组织块体积的10-20倍，以达到组织充分固定的效果

4) 固定时间：根据组织块大小而不同，0.5cm直径组织块一般 18-24h。固定时间不宜太长，＞48h 过度固定（抗原遮蔽、RNA 降解）

四、FFPE 蜡块要求（如果送的样本为蜡块样本） 

1) 组织固定需符合 1 中的要求；

2) 存放条件：将蜡块放入干燥器中，保持干燥环境，室温保存；

3) 蜡块年龄：小于 3 年的蜡块 Nanostring 做过实验验证没有问题，3-10 年的蜡块Nanostring 项目做过类似服务可以得到比较理想结果，超过 10 年的蜡块需要客户自行验证蛋白与RNA 的完整性。

4) 蜡块质量：石蜡致密无空洞、无裂纹、无发白粉化。组织与蜡结合紧密，无脱裂、无空鼓。蜡块表面平整，无凹陷、无溢蜡过厚。

五、HE复诊

做 TMA 前必须先切 HE 片染色：定位靶点、确认组织结构完好，再上机打孔。

1) 每例供体蜡块常规切片、裱片、HE 染色。

2) 病理镜下或扫描成像确认：癌区、癌旁、正常组织、病变靶点位置。

3) 用记号笔在蜡块表面精准圈定目标取材区域，避开坏死、钙化、出血区。

六、组织芯片排布 & 打孔常用规格

1) 常用孔径：1.0 mm / 1.5 mm / 2.0 mm；芯间距 0.3～0.5 mm。

2.0 mm直径，5行*13列--65芯（大病灶、需更多细胞量）

1.5mm直径，8行*18列--144芯（最通用、常规临床样本首选）

1.0mm直径，10行*22列--220芯（微小病灶、穿刺标本、小动物组织、样本数量多阵列）

2) 每例建议至少2～3 个复孔，减少位点缺失，满足统计学要求。

七、Nanostring DSP 专属规格（贴片区域是35.3mm*14.1mm）

1) 2.0 mm直径，5行*13列--65芯

2) 1.5mm直径，6行*17列--102芯

3) 1.0mm直径，8行*20列--160芯

八、送样要求

九、注意事项

1) 新鲜组织固定超时 / 固定液不对 → 抗原报废；

2) 蜡块粉化、开裂、组织空鼓 → 打孔掉芯、脱片；

3) 不先 HE 复诊直接打孔 → 打不到病灶、位点无效；

4) 组织过厚 / 过薄 → 脱水不佳、阵列高低不平；

5) 老旧多年蜡块强行做 TMA → 染色普遍无信号、背景极高；

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