细胞培养
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细胞培养
细胞培养也叫细胞克隆技术,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养的步骤
细胞培养的具体步骤可分为复苏、传代、冻存。实验所需试剂:冻存细胞、培养基、血清、细胞培养皿、DMSO、程序降温盒等。
 细胞复苏:
1、将含有细胞的冻存管插入浮漂转移至37℃的水浴锅中1-2min;
2、将冻存管转移至生物安全柜中,用移液器将细胞悬液转移至无菌EP管,300g离心5min;
3、用移液器吸去上清,加入1ml新鲜培养液重悬细胞沉淀,将细胞转移至细胞培养皿中,加入适量细胞培养液;
4、将细胞培养皿转移至37℃、5%CO2恒温培养箱培养并观察细胞生长状态(显微镜下观察的两株肝癌细胞系)。
 细胞传代:
1、在显微镜镜下观察细胞生长状况达到可传代后,弃去培养基;
2、向培养瓶中加入适量PBS,摇晃均匀;(注意:加入PBS应沿瓶壁加入,避免细胞损伤);
3、加入适量的消化液(abs47047375)镜下观察细胞情况,确认细胞形态变至圆形后,终止消化;
4、将消化后的悬浮液收集至无菌离心管,300g,5min收集细胞沉淀;
5、用适量培养基重悬细胞沉淀,加入新的培养基分皿;
6、放入37℃,5% CO2培养箱中培养,观察细胞状态。
(注意:不同细胞可能培养条件不同,应根据需求做适当调整)
 细胞冻存:
1、加入适量的消化液,离心收集细胞,并重悬细胞;
2、加入冷冻保存液,将细胞悬液转移至冻存管;
3、将冻存管转移至程序降温盒并将其放入-80℃冰箱;
4、24h后将冻存管取出转入液氮长期保存。
注意:a、细胞悬浮液转移至冻存管时不要超过最大量程。
b、细胞在-80℃只可短期保存最好不要超过3个月。
显微镜下观察的两株肝癌细胞系(左图是SMMC-7721 ;右图是JHH7)
三、LabEx流式服务实例分享
LabEx 流式服务实例分享—小鼠肿瘤(PD-1药物治疗人源化小鼠)的7色分析
LabEx采用BD Celesta(3激光12色)对PD-1药物治疗人源化小鼠(肿瘤)进行T细胞及调节性T细胞(Tregs)7色分析实例。整个panel全部为包括表面marker和核内转录因子,抗体使用量按照厂商推荐。
   
 实验Panel:
  
 实验结果:
细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域,成为最重要的基础科学之一。培养的细胞免疫学研究、肿瘤研究、感染疾病、药效评价、药物研发、细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析等,可以用来做多因子实验(CBA、Luminex、MSD等)、流式实验、PCR实验等。
实验服务意向:
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