RT-PCR
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Real time RT-PCR
real time RT-PCR指的是 qPCR + RT-PCR的组合,是将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析。RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是聚合酶链式反应(PCR)的一种常见的应用。qPCR(Quantitative Real-time-PCR)是利用荧光染料剂检测每次PCR循环后产物总量的技术,包括探针法和染料法。
 原理:
①探针法
TaqMan探针法qPCR的原理是在PCR扩增时加入特异性的TaqMan荧光探针,该探针与模板特异性地结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整时,报告荧光基团发射的荧光信号会被淬灭荧光基团吸收,使仪器检测不到荧光信号。Taq DNA 聚合酶的5'-3'核酸外切酶活性将探针5’端连接的报告荧光基团切割下来,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而发出荧光。
②染料法
荧光染料法能够监测每次PCR循环后产物总量,可以实现实时监控的功能。 SYBR染料在游离状态下只能发出微弱的荧光,当其与DNA双链结合时发出荧光能够被仪器检测到。
 应用方向:
①基因表达
实时定量PCR是基因表达检测最常用得方法之一,能够通过荧光信号监测PCR扩增的过程,最终通过标准曲线对未知模板进行定量分析。
②细胞中RNA病毒的含量
在病毒诊断中,RT-PCR通过分析基因达量来判断细胞中RNA病毒的含量,新冠检测就是用到这一技术来进行核酸检测。
 数据展示 :
炎症:是机体对于刺激的一种防御反应,主要表现为红肿热痛。炎症是人体的一种正常反应,当时过度炎症的话会对人体造成损伤。PCR能够检测炎症因子的表达水平。
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