复仇者联盟中各路英雄强强联合成功打败灭霸，今天小备给小伙伴们分享一篇多技术强强联合“打败”慢性肝炎的好文！

研究背景

慢性乙型肝炎（CHB）是一种严重的全球公共健康问题，影响超过2.57亿人。尽管现有的抗病毒治疗能够有效抑制病毒复制，但由于乙肝病毒（HBV）的共价闭合环状DNA（cccDNA）的持续存在，完全治愈仍然是一个巨大挑战。

功能性治愈（FC），即HBV表面抗原（HBsAg）的消失，被认为是慢性 乙肝治疗的理想终点，但其背后的免疫机制尚未完全阐明。本次介绍的研究通过多种技术串联应用揭示了CHB患者与功能性治愈患者的免疫学差异，并为开发新型治疗策略提供了重要启示。

研究设计

多技术串联构建高分辨率免疫图谱

研究对29例CHB患者（可以检测到病毒HBsAg）和9例功能性治愈患者进行了肝脏活检及外周血采样，使用了单细胞RNA测序（scRNA-seq）、多参数流式细胞术、多重免疫荧光（mIF）及Luminex多因子检测等技术构建了高分辨率的免疫图谱。通过多技术串联应用，研究详细解析了功能性治愈患者的肝内免疫细胞状态，发现其与外周血存在显著差异。提示外周血检测可能不足以反映肝脏微环境的真实免疫状态。

 图1：workflow

主要研究发现

1、单细胞测序+流式：揭示免疫系统的关键差异

1）通过单细胞RNA测序对CHB和功能性治愈患者肝脏和外周血中的细胞进行精细分群，发现功能性治愈患者的肝脏中，自然杀伤细胞（NK）和中性粒细胞的比例显著增加，而FC患者的肝脏中几乎完全缺失了衰竭的CD8+ T细胞。而外周血中未观察到相同变化，这表明，仅依靠外周血免疫细胞分析可能不足以全面揭示慢性乙肝的免疫特征。

图2：从CHB与FC患者中分离的肝脏和匹配PBMCs的单细胞转录组图谱

2）在功能性治愈患者中，CD8+T细胞的衰竭标志物（如PDCD1、LAG3、TIGIT）显著减少，同时出现了一种新的CD4+细胞毒性T淋巴细胞（CD4-CTLs），其表现出炎性和细胞毒性效应。

图3：FC的患者表现出调节性T细胞的丧失、衰竭的CD8+T细胞以及CD4相关的适应性免疫应答的出现

3）通过流式细胞分析患者的CD4和CD8+T细胞表型，发现FC患者CD4和CD8 +T细胞表现出更强的效应器功能和记忆样T细胞频率增加。此外，在HBV特异性T细胞库的研究中发现，FC患者中更多的HBsAg和HBV聚合酶特异性CD4 +T细胞表现出更高的多功能性（图3I）。这表明在FC患者中，CD4 T细胞具有重要的效应器功能，对长期治愈具有关键作用。

2、多因子检测：揭示炎症相关因子的变化

文章通过Luminex多因子检测技术，对功能性治愈患者与慢性乙肝患者的血浆进行了细胞因子、趋化因子和可溶性受体的分析。发现在FC患者的肝脏中存在免疫活跃状态的逐渐转变。通过分析血浆数据观察到炎性细胞因子和趋化因子逐渐增加，qHBsAg水平下降。对中性粒细胞进行研究。发现中性粒细胞在FC患者中可能扮演重要角色，影响免疫反应和肝脏疾病的发展和治疗。

图4：FC患者肝脏内存在边缘中性粒细胞

总结

该研究通过单细胞免疫景观揭示了功能性治愈慢性乙型肝炎患者的新发现，特别是对激活的先天免疫和改变的CD4-CTL驱动的适应性免疫的发现为我们理解乙肝治愈机制提供了新的视角。研究使用的单细胞测序+流式+多因子+免疫荧光检测的多技术串联为我们提供了可复制和验证的实验路径。此外，研究使用了多种数据分析方法，如聚类分析、降维分析和可视化等，全面了解了功能性治愈患者的免疫特征。

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、蛋白芯片、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。