多因子实验第一步，样本处理很重要。

正确的样本处理不仅能够保护生物标志物的完整性，还能确保实验结果的准确性和可靠性。

今天小备带大家深入了解样本处理的细节，让科学研究少走弯路！

首先，简单的了解一下多因子实验的样本如何分类---

样本处理：精准检测的第一步

多因子样本处理中不同类型的样本处理时有哪些步骤与小tips呢？

血清样本

（视频链接：https://www.u-labex.com/article-6053.html）

1. 新鲜收集血液样本，室温静置30-45分钟凝固。

2. 离心（4℃, 1000g，10-15分钟），取上清转移到干净的试管中。

3. 二次离心（4℃, 10000g，10分钟），完全去除血小板及其他沉淀物。

4. 标记样本采集日期、时间、批号、来源等。

5. 若当天检测，4℃储存；若隔天或更久之后检测，-80℃储存，以100-200μl分装储存，避免反复冻融。

Tips：两次离心为差速离心法。

血浆样本

（视频链接：https://www.u-labex.com/article-6052.html）

1. 抗凝采血管收集。

2. 离心（4℃, 1000g，10-15分钟），取上清转移到干净的试管中。

3. 二次离心（4℃, 10000g，10分钟），完全去除血小板及其他沉淀物。

4. 标记样本采集日期、时间、批号、来源等。

5. 若当天检测，4℃储存；若隔天或更久之后检测，-80℃、100-200μl分装储存，避免反复冻融。

●Tips: 

获取血浆样本可用多种抗凝剂（如下图）。大多数细胞因子的检测都可使用EDTA抗凝管。

●Tips：血清样本与血浆样本的比较

1. 根据研究需求选择血清/血浆

2. 尽量避免有溶血，高血脂的样本

3. 根据某些文献，唾液可能含有高丰度的某些心血管相关标志物（ MPO, SAA, and Lipocalin-2/NGAL），避免唾液污染

4. 某些心血管标记物（如D-dimer) 建议使用血浆

5. 若使用肝素（heparin）抗凝，可导致Troponin-I 和 troponin-T偏低（吸附导致）

6. 某些文献表明若使用肝素或柠檬酸钠抗凝，可导致VEGF, MCP-1, eotaxin, factor VII偏高

7. 在某些文献的对比实验中，a-2 Macroglobulin, BDNF, EGF, ENA-78, IL-8, PAI-1, and TIMP-1 在血清中的表达高于血浆 （EDTA, 柠檬酸钠或肝素抗凝）

组织样本

（视频链接：https://www.u-labex.com/article-6056.html）

1. 将适量裂解液（推荐abs9225）加入组织中（裂解液需要加入蛋白酶抑制-推荐abs9161），

2. 用组织匀浆仪处理至组织匀浆后，放置于冰箱（4℃，30min），

3. 两次离心后取上清，

4. 组织裂解液需测定BCA总蛋白浓度（推荐abs9232），

5. 分装后-80℃冻存，避免反复冻融。

●Tips：

1. 裂解液中不能含有SDS等离子去垢剂成分，

2. 必须加入酶抑制剂，防止降解；如用于代谢标志物表达谱分析，则必须额外加入磷酸酶抑制剂，

3. 尽量在冰上或4℃环境中处理样本

4. 若无法及时处理组织时，只需将组织样本清洗后直接冻存，无需加保存液。

细胞上清

（视频链接：https://www.u-labex.com/article-6057.html）

1. 3000g x离心10分钟，收集上清，分装100-200ul/管，-80℃冻存。

Tips：

1. 转移到干净的EP管内，如果还有沉淀，再以3000g， 4℃离心10min去除残留沉淀物。

2.如果是无血清培养，则需要额外添加5-10%的血清或0.5-1%的BSA以稳定目标蛋白，避免吸附。

3. 由于 TGF-β 在物种间有较高的保守性，且动物血清中含有大量的 TGF-β，因此在检测细胞培养上清液样本时，尽量使用无血清培养基。如果已经在培养基中添加了动物血清，可以添加 baseline 的对照，以获得样本中 TGF-β 的准确值。

4. 建议培养细胞时准备复孔（避免边缘效应）

体液类样本

(肺泡灌洗液、尿液、关节滑膜液、脑脊液、痰液、唾液、鼻腔灌洗液等)：

1. 两次离心后取上清，分装后-80℃冻存。

●Tips：两次离心为差速离心法。

其他样本

(鼻腔分泌物、泪液、子宫腔液、阴道分泌物等)：

1. 收取样本后将棉签/棉片/其他收集物放入“去除底部”的小试管

2. 将“1”中小管套入大试管中

3. 立即用等量生理盐水或样本稀释液完全冲洗“收集物”（如100uL）

4. 离心，取上清（最终上样量不得少于60uL），分装后-80℃冻存。

●Tips：

1. 冲洗时，每个样本需使用等量的冲洗液

2. 避免使用大量冲洗液，可能会导致“待检测物”被过度稀释。

除以上介绍的样本类型外，LabEx拥有几十种样本处理经验，如果您有其他特殊样本，欢迎联系我们获取处理方法~

样本运输条件：所有样本均需用干冰运输，确保样本在运输过程中保持其生物活性。

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、蛋白芯片、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

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