凋亡实验Annexin V染色为何不推荐用胰酶消化细胞
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常用的消化酶一览

    

按照酶解能力做排序

  

问题:

含EDTA胰酶经常用来消化贴壁细胞,

但是在凋亡Annexin V染色中,

为何推荐尽量避免使用胰酶呢?

   

1. EDTA离子螯合剂影响染色

  

  • Binding Buffer中含钙离子,由于Annexin V和磷脂酰丝酸结合时需要钙离子,所以Binding Buffer有利于Annexin V和磷脂酰丝氨酸的结合。
  • 不推荐含有EDTA的胰酶去消化贴壁细胞,是因为它能够与Ca钙离子结合,从而影响AV与PS的结合。
  • 如使用含EDTA的胰酶,需用PBS清洗,但在消化过程中仍会对细胞造成一定损伤,并且会降解Annexin V, FITC结合物,导致结果误差,因此尽可能使用不含有EDTA的胰酶消化样品细胞

   

2. 对实验数据的影响

  • 样本:UM-SCC-12肿瘤细胞系
  • 酶的选择4种:1× TrypLE , Accutase, 0.25% Trypsin,Accumax.
  • 消化时间&温度:37°C for 5 min
  • 实验:Annexin FITC+7-AAD双色凋亡染色

(左) TrypLE and (右) Trypsin两种酶得到的凋亡实验结果

1.细胞活力和凋亡比例的区别

2.TrypLE对应的样本,有较高的细胞活力

3.Acctuase对应的样本,有较高的凋亡比例

3.针对Accutase,你了解哪些?

    

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