在病毒研究领域，新冠（COVID-19）、非典（SARS）、中东呼吸综合征（MERS）的科研探索从未停歇。尤其是细胞因子风暴（CRS），作为病毒致病关键环节，其临床特征、作用机制与治疗策略，始终是科研人员争相攻克的 “高地”。而在这场科研攻坚战中，TNF-α、IL-1、IL-6 等细胞因子的检测效率与精准度，成为突破瓶颈的核心要素。
CBA（Cytometric Bead Array，流式液相多重蛋白定量技术），凭借丰富的检测因子种类与超高灵敏度，迅速成为科研实验室的 “心头好”。不过，优质数据的诞生，不仅依赖前端检测，后端分析同样至关重要。FlowJo® 软件，正是数据处理环节的 “得力干将”。
如今，FlowJo exchange 官网已上线最新 v4.3 版本 CBA 数据处理插件。想知道如何借助它，轻松实现 CBA 数据的高效处理？这就为你揭开操作全流程！
一、下载插件及安装
1.建议用Chrome浏览器，网址是https://www.flowjo.com/exchange/#/。
2.找到CBA插件后点击下载。
3. 解压下载的压缩包后，找到后缀名为 jar. 的文件，将其复制粘贴到 FlowJo 软件指定的插件安装路径中。完成这一步操作后，重启 FlowJo 软件，插件即可生效。
Tips：CBA插件不依赖R，一步搞定！
二、使用步骤
1. 区分标准品与样本数据
打开待分析的实验数据，在 FlowJo 软件中激活 CBA 工作界面。进入界面后，第一步需精准划分数据类型 —— 将所有样本归类为 “样本组”，标准品数据单独归为 “标准组”。这一步是后续分析的基石，直接关系到标准曲线构建与样本浓度计算的准确性，务必仔细核对数据分组，避免混淆。
2. 精准定位微球群体
在完成数据分组后，点击 “Next” 进入 “Beads” 步骤。此时，需逐一检查每个样本的圈门划定是否精准，确保微球群体被完整且准确地圈选。若发现圈门位置存在偏差，可直接双击右侧的 FSC与 SSC流式图，通过手动调整边界，实现圈门的精细化定位，为后续细胞因子分析筑牢基础。
Tips：在 Graph window 窗口完成圈门位置的调整后，软件显示界面可能不会立即同步更新。此时只需在不同样本间快速切换，调整后的圈门结果便会实时呈现，助你高效完成操作。
3. 选定检测细胞因子类型
确认微球群体圈门无误后，点击 “Next” 进入 “Clustering” 环节。这一步的核心是精准匹配实验所使用的 CBA 试剂盒类型，确保软件识别与实际检测的细胞因子一一对应，为后续数据的准确解析做好准备。
Tips：若在预设表单中未能找到实验所用的 CBA 试剂盒，别担心！点击 “CUSTOM” 按钮，即可根据实际需求自定义检测因子信息，轻松适配多样化实验场景。
4. 精确定位细胞因子微球群
选定试剂盒类型后，数据处理进入关键校准阶段。此时，需对每个细胞因子对应的微球群体圈门进行二次核查与优化，确保圈门精准框定目标微球，避免因圈定偏差导致的分析误差，为后续浓度计算奠定坚实基础。
Tips：处理单参数 CBA 试剂盒数据时，无需启用 2D Clustering 功能，常规将 Reporter 参数设为 PE，Clustering X 设为 APC，即可满足分析需求。若实验涉及第三参数（如多色荧光标记），则需开启 2D Clustering 按钮，保持 Reporter 和 Clustering X 参数设置不变，将 Clustering Y 参数调整为 FL-3（适用于 Calibur 机型）或 APC-Cy7。若自动圈群结果不理想，双击右侧流式图打开 Graph Window，通过手动微调实现圈群边界的精准校准。
5. 设定标准曲线浓度参数
完成所有样本的细胞因子微球群定位后，点击 “Next” 进入 “Concentration” 环节，这一步将为标准曲线构建设定关键参数。
Tips：在此步骤中，需根据实验设计设定标准品的起始参数 —— 选择合适的最高浓度（如常用的 5000pg/ml）与稀释比例（如 1:2），点击 “Dilute” 即可自动生成浓度梯度。若实验条件特殊，可灵活调整最高浓度与稀释比。此外，通过表格上方的切换选项，能快速切换不同细胞因子，独立设定各因子的标准曲线参数。
6. 完成标准曲线绘制与样本浓度计算
参数设定完毕后，进入关键的结果确认阶段。此环节需逐一核查每个细胞因子的回归分析数据，确保标准曲线拟合准确，为最终样本浓度计算提供可靠依据。
Tips：在确认回归分析结果时，需重点关注 R 方值（越接近 1 表明拟合效果越优），同时仔细查看拟合曲线形态，以及各因子在不同样本中的浓度值与 MFI（平均荧光强度）数据。若对拟合效果不满意，可通过界面顶部的切换按钮，在多种拟合模式中选择最适配数据特点的选项，优化分析结果。
7. 高效导出分析结果
完成所有数据核查与参数优化后，点击 “Finalize” 按钮进入结果输出环节。借助 Layout editor（布局编辑器）和 Table editor（表格编辑器），可灵活调整数据展示格式，将回归分析结果以清晰直观的形式导出，满足不同科研场景的数据呈现需求。
三、亮点介绍
1. 操作流畅易上手
整个分析流程设计简洁直观，即便初次接触，也能快速掌握核心操作要点，轻松实现高效的数据处理。
2. 多维度结果可视化
FlowJo® CBA 插件支持多因子回归分析结果的同步输出，可在同一张图表中整合呈现预测曲线、标准曲线与样本检测值，通过 “三值合一” 的可视化方式，直观展现数据间的关联性与趋势变化，助力科研人员快速捕捉关键信息。
3. 除了导出纯数值的 MFI 值，FlowJo® 软件还支持以 Heatmap（热图）形式直观呈现分析结果，通过色彩梯度清晰展现数据分布与差异，让复杂的检测结果一目了然，大幅提升科研数据的可读性与分析效率。
乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、蛋白芯片、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
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