一、引言
蛋白质翻译后修饰是拓展蛋白质组功能多样性的重要机制，其中糖基化作为最普遍的修饰类型之一，参与调控从胚胎发育到细胞信号传导等一系列关键生物学过程。据统计，约 50% 的人类蛋白质经历糖基化修饰，其修饰状态的异常变化与炎症、癌症等多种疾病密切相关。因此，建立精准的糖基化分析方法对揭示疾病机制及开发靶向治疗策略具有重要意义。本文系统阐述糖基化修饰的主要研究方法，包括聚糖结构解析、糖蛋白鉴定及修饰位点定位等核心技术。
二、糖基化修饰的生物学特征
蛋白质糖基化主要分为 N - 糖基化（聚糖通过 β- 糖苷键连接于天冬酰胺侧链氨基）和 O - 糖基化（聚糖连接于丝氨酸 / 苏氨酸羟基）两大类。与磷酸化、乙酰化等修饰相比，糖基化具有显著的结构复杂性，其聚糖链可包含多种单糖组分（如 GlcNAc、Man、Gal 等）并形成复杂的分支结构。这种结构多样性决定了糖基化分析需综合运用分离技术、质谱检测及生物信息学工具，以实现从聚糖结构、修饰蛋白到具体修饰位点的多层次解析。
三、糖基化分析的核心技术体系
糖基化分析通常遵循三种技术路径，分别针对完整糖蛋白、酶解糖肽及游离聚糖开展检测，每种方法各有其技术优势与适用场景：
（一）聚糖结构的独立分析
该方法通过酶法或化学法从糖蛋白中释放聚糖：
- 释放技术：采用肽 N - 糖苷酶 F（PNGase F）或 A（PNGase A）特异性切除 N - 糖链，O - 糖链则需通过肼解（hydrazinolysis）等化学方法释放。
- 分离检测：释放的聚糖经荧光标记（如 2-AB、2-AA 标记）后，利用亲水作用色谱（HILIC）或反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离，结合质谱（MS）或毛细管电泳（CE）进行结构解析。该方法可精准测定聚糖的单糖组成、连接方式及分支结构，常用于糖链表达谱分析。例如，通过比较肿瘤细胞与正常细胞的聚糖图谱，可发现特异性糖链标志物。
（二）糖肽水平的修饰定位
该策略通过酶解糖蛋白获得糖肽，结合液相色谱 - 质谱联用技术实现修饰位点鉴定：
- 酶解与富集：胰蛋白酶消化糖蛋白生成糖肽，利用凝集素亲和层析（如 ConA、WGA）或亲水相互作用色谱选择性富集糖肽，提高检测灵敏度。
- 质谱分析：采用 LC-MS/MS 技术对糖肽进行分析，通过特征性碎片离子（如聚糖特异性报告离子）确定糖基化位点。例如，在胎球蛋白糖基化研究中，经 Cc5 细菌处理后，通过胰蛋白酶酶解结合 LC-MS 检测，可观察到特定糖肽的糖基化模式变化，从而揭示细菌感染对糖基化修饰的调控机制。该方法的优势在于能够同时提供修饰蛋白身份及具体位点信息，是目前糖基化位点分析的主流技术。
（三）完整糖蛋白的质谱表征
直接对完整糖蛋白进行质谱分析，可获取糖基化修饰的整体轮廓：
- 技术优势：无需酶解预处理，保留糖蛋白的完整分子信息，适用于糖型分布分析及分子量测定。
- 技术局限：受限于糖蛋白分子量较大（通常 > 10 kDa）及电荷异质性，质谱分辨率及质量精度要求极高，且难以定位具体修饰位点。因此，该方法常作为前两种技术的补充，用于糖蛋白宏观修饰状态的初步筛查。
四、技术应用与研究趋势
糖基化分析技术在基础研究与转化医学中展现出重要价值：在基础研究领域，通过解析细胞表面糖蛋白的糖基化模式，可揭示细胞黏附、信号传导的分子机制；在医学应用中，糖基化异常相关的糖链标志物（如肿瘤相关糖抗原）已成为疾病诊断的重要依据。未来研究趋势包括：
- 高通量分析：开发自动化样品处理平台，结合高分辨质谱（如 Orbitrap、FT-ICR）提升分析通量；
- 位点特异性定量：引入稳定同位素标记技术（如同位素编码亲和标签，ICAT），实现糖基化位点的绝对定量分析；
- 多组学整合：结合基因组、转录组及蛋白质组数据，构建糖基化修饰的调控网络，深入解析其生物学功能。
五、结论
蛋白质糖基化修饰的研究涵盖从聚糖结构解析到修饰位点定位的多层次技术体系，每种方法各有其适用场景与技术瓶颈。随着质谱技术的革新及分离富集方法的优化，糖基化分析正朝着精准化、高通量方向发展，为揭示糖基化在生理病理过程中的调控机制提供强大的技术支撑。
乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
