单细胞测序技术的出现，为解析细胞异质性提供了革命性工具，使研究者能够深入探究单个细胞的基因表达模式，推动了胚胎发育、肿瘤生物学等领域的突破性进展。然而，传统单细胞测序依赖细胞裂解的分析模式，难以捕捉细胞真实的动态生理状态。近年来，基于 FluidFM 技术的 Live-Seq 方法实现了关键突破，在保持细胞活性的前提下完成转录组分析，为单细胞研究开辟了全新维度。
单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）通过分离单个细胞、裂解后提取 RNA 进行分析，已成为解析细胞亚群特征的核心手段。但该技术存在显著局限：
动态分析缺失：细胞裂解后无法对同一细胞进行时序追踪，仅能获取某一时刻的 "静态快照"，难以研究细胞周期、分化过程中的基因表达动态变化。例如，无法直接观察干细胞分化过程中基因表达的连续转变，只能通过不同时间点的细胞群推断轨迹。
样本处理偏差：细胞分离、酶解及裂解操作会激活应激反应，导致热休克蛋白、炎症因子等基因异常表达。研究证实，机械分离可使细胞应激相关基因表达上调 2-3 倍，干扰对细胞固有状态的判断。
表型关联断裂：细胞被破坏后，无法将转录组数据与细胞形态、功能（如迁移能力、分泌活性）或后续表型变化直接关联，限制了基因表达与细胞功能关系的深入解析。
瑞士科研团队基于 FluidFM（流体力显微镜）技术开发的 Live-Seq 方法，实现了活细胞转录组的无损分析，其技术原理与优势体现在：
FluidFM 整合原子力显微镜与微流控系统，通过纳米级探针（直径 0.5-2 微米）实现高精度操作。Live-Seq 核心流程包括：
单细胞定位：显微镜下识别目标细胞，控制探针轻柔接近；
无损取样：通过微流控通道施加温和负压，提取皮升级（10⁻¹² 升）细胞质，仅占细胞体积的 5%-10%，不破坏细胞膜；
RNA 处理：样本立即与保护缓冲液混合，经优化的 Smart-seq2 方法完成 cDNA 合成与扩增；
测序与追踪：高通量测序后，对取样细胞继续培养观察，实现转录组与细胞活性的同步分析。
多功能单细胞显微操作系统- FluidFM
Live-Seq 的突破在于 "无损性" 与 "动态性" 的结合：
保持细胞活性：实验显示取样后细胞存活率超 80%，仍能正常分裂、分化。成纤维细胞取样后仍可迁移并表达胶原蛋白，证明功能完整性；
真实转录组捕获：避免应激反应干扰，应激基因（如 HSP 家族）表达水平较传统方法降低 40%-60%，细胞周期基因表达更贴合实际分裂阶段；
动态追踪能力：通过多次取样可构建同一细胞的转录组时间序列。在细胞周期研究中，成功捕捉到 G1/S 期转换时 cyclin 基因的连续上调；
表型关联分析：实现转录组数据与细胞形态、功能的直接对应，如将免疫细胞的细胞毒性与基因表达模式关联。
Live-Seq 技术为单细胞研究提供了全新范式，其应用潜力与发展方向包括：
在细胞动力学领域，可追踪干细胞分化过程中的基因表达动态，揭示细胞命运决定机制；在免疫研究中，实时监测 T 细胞激活过程的转录组重塑，解析免疫应答启动机制；在微生物研究中，分析菌群个体的基因表达异质性及环境适应过程。
在肿瘤研究中，可关联癌细胞转录组与耐药表型，识别化疗耐药关键基因；在再生医学中，筛选具有特定转录组特征的干细胞，预测分化潜能；在传染病研究中，追踪病毒感染过程中宿主细胞的转录组变化，解析病毒 - 宿主相互作用。
未来将聚焦于：提高低丰度 RNA 捕获效率，提升测序深度；拓展至蛋白质组、代谢组等多组学分析；开发自动化系统提高通量；结合空间转录组技术，实现组织原位的无损测序，保留细胞空间位置信息。
Live-Seq 技术通过无损取样突破了传统单细胞测序的局限，实现了细胞转录组的动态、真实分析。其不仅推动基础研究中细胞动态过程的解析，更为临床研究提供了基因表达与细胞功能关联的新工具。随着技术完善，Live-Seq 将推动单细胞测序向更高分辨率、多组学整合方向发展，为生命科学与精准医学带来更广阔前景。
乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
