酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）自 20 世纪 70 年代诞生以来，凭借 “抗原 - 抗体特异性结合” 与 “酶催化信号放大” 的巧妙结合，成为生命科学、临床诊断等领域的 “标配” 技术。它既能定性判断样品中是否存在目标分子（如病毒抗原、特异性抗体），又能通过显色强度精准定量（检测下限可达 pg 级），这种 “一专多能” 的特性，让它在半个多世纪后仍稳居检测技术的核心地位。
简单来说，ELISA 的精髓在于 “固相化反应 + 酶促放大”：将抗原或抗体固定在聚苯乙烯微孔板上，让免疫反应在载体表面定向发生，再用酶标记的分子追踪结合信号，最终通过底物显色 “放大” 微量目标的存在。这种设计既保证了检测的特异性，又解决了微量物质难以捕捉的难题。
酶联免疫吸附原理：基于抗原抗体特异性结合与酶催化显色反应的检测原理。
ELISA 的工作机制可拆解为三个核心环节，缺一不可：
抗原 - 抗体的 “精准配对”：如同钥匙与锁，抗原与抗体的结合具有高度专一性。例如，新冠病毒的刺突蛋白（抗原）只会与人体产生的抗刺突蛋白抗体结合，这种特异性是 ELISA 排除干扰的基础。
固相载体的 “锚定作用”：聚苯乙烯微孔板是 ELISA 的 “舞台”，其表面能吸附蛋白质分子，将抗原或抗体固定其上。这种 “锚定” 让免疫反应局限在板孔内，便于后续洗涤去除未结合的杂质，避免信号混乱。
酶的 “信号放大术”：辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（ALP）等酶分子如同 “信号放大器”—— 当酶标记的抗体与固相上的免疫复合物结合后，加入底物（如 TMB），酶可催化底物快速显色（HRP 使 TMB 从无色变为蓝色，加终止液后呈黄色）。哪怕只有少量酶，也能产生肉眼可见的颜色变化，让微量目标无所遁形。
ELISA 并非单一技术，而是根据检测目标衍生出四种经典方法，各有侧重：
这是检测蛋白质等大分子抗原的首选方法，如同用两把钳子夹住目标。流程为：先将 “捕获抗体” 固定在板上，加入样品后，目标抗原会与捕获抗体结合，再加入 “酶标检测抗体”（识别抗原的另一部位），形成 “抗体 - 抗原 - 酶标抗体” 的三明治结构。最后通过显色强度判断抗原含量。
优势：两次抗体识别，特异性极高；
局限：仅适用于有多个抗原位点的大分子，小分子 “夹不住”。
检测血液中的抗体（如乙肝抗体）常用此法。先将抗原固定在板上，加入待检血清，若血清中有目标抗体，会与抗原结合，再加入 “酶标二抗”（抗人抗体的抗体），二抗与血清中的抗体结合后催化显色。由于一个抗体可结合多个二抗，信号被放大，灵敏度更高。
优势：一次标记可检测多种抗体，成本低；
局限：二抗可能与样品中其他成分反应，导致背景偏高。
将抗原固定后，直接加入酶标抗体，一步结合即可显色。步骤少、耗时短（约 2 小时），适合快速筛查。但因无信号放大，灵敏度较低，且每种抗原需单独标记抗体，成本较高，应用场景较窄。
针对激素、药物等小分子（无法被双抗体夹住），竞争法更适用。原理是 “抢抗体”：板上固定抗原，样品中的小分子与酶标小分子一起竞争结合有限的抗体 —— 样品中目标分子越多，酶标分子结合越少，显色越浅。通过颜色深浅反推小分子含量。
优势：适用于小分子检测；
局限：灵敏度较低，对实验条件要求严格
无论哪种方法，ELISA 的操作都遵循固定流程，每一步都影响结果准确性：
-
- 包被：将抗原 / 抗体稀释后加入微孔板，4℃过夜让其吸附在板上，如同 “搭建舞台”。
- 封闭：用牛血清白蛋白（BSA）填充板上未被占据的位置，避免后续杂质 “乱入”，降低背景。
- 加样孵育：加入样品或标准品，37℃孵育 1 小时，让目标分子与板上的抗原 / 抗体充分结合。
- 洗涤：用含吐温 - 20 的缓冲液洗板 3-5 次，彻底冲走未结合的杂质 —— 这是减少误差的关键，堪称 “ELISA 的灵魂步骤”。
- 加酶标试剂：加入酶标记的抗体 / 抗原，37℃孵育 30 分钟，让酶分子 “锁定” 目标复合物。
- 再次洗涤：重复步骤 4，确保只有结合的酶分子留在板上。
- 显色：加入底物（如 TMB），37℃避光反应 10-30 分钟，直至颜色达到预期深度。
- 终止与读数：加硫酸终止反应，用酶标仪在 450nm 波长测吸光度（OD 值），对照标准曲线计算浓度。
酶联免疫吸附应用领域：广泛应用于医学诊断、生物研究和食品安全检测。
临床诊断：肝炎、艾滋病等传染病的抗体筛查，肿瘤标志物（如 CEA、AFP）的定量监测，类风湿性关节炎的自身抗体检测等。
基础研究：细胞因子（如 IL-6、TNF-α）的分泌水平分析，激素（如胰岛素）的浓度测定，为疾病机制研究提供数据。
食品安全：检测牛奶中的抗生素残留、蔬菜中的农药超标，或肉类中的瘦肉精，守护 “舌尖上的安全”。
药物研发：监测临床试验中药物的血药浓度，评估疫苗接种后的抗体效价，加速新药上市进程。
ELISA 的长盛不衰源于其独特优势：特异性强、灵敏度高、操作简单，且成本远低于质谱等高端技术，适合大规模样本检测。但它也有短板：开发新检测方法需制备特异性抗体，周期长；样品中的杂质可能干扰结果；只能检测分子含量，无法反映其活性。
即便如此，在快速检测、基层医疗、大规模筛查等场景中，ELISA 仍无可替代。它的成功证明：真正有价值的技术，不在于复杂，而在于精准解决实际问题。从实验室到医院检验科，ELISA 始终是那个默默守护检测准确性的 “幕后功臣”。
乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。
我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。
沪公网安备31011502400759号
营业执照(三证合一)
