一、引言

二、Luminex 技术的原理与核心优势

（一）技术原理

荧光编码微球：采用两种荧光染料按比例混合形成 100 种独特编码微球，每种微球包被特异性抗体，可识别特定靶分子；

三明治免疫反应：样本与微球孵育后，靶分子与抗体结合，再加入荧光标记的检测抗体形成复合物(如图)；

双激光检测：一束激光识别微球编码（确定检测指标），另一束激光定量荧光信号（反映靶分子浓度），实现单一样本中多指标同步分析。

（二）技术优势

高通量多参数分析：单一样本（25-50μL）可同时检测 100 种分析物，满足 CAR-T 研究中细胞因子、表面标志物等多指标联合分析需求；

高灵敏度与宽动态范围：检测下限达 pg 级，动态范围覆盖 4-5 个数量级，可同时量化高低丰度分子；

样本兼容性强：适用于细胞培养液、血清等多种样本类型，尤其适合体外扩增中少量样本的检测；

良好重复性：自动化流程确保批内 / 批间变异系数 < 10%，结果可靠性高。

三、在 CAR-T 细胞制备过程中的应用

（一）T 细胞分选的质量控制

分选后 T 细胞纯度（通常需 > 85%）；

记忆性 T 细胞亚群（如 CD45RA⁺CD62L⁺中央记忆 T 细胞）比例，这类细胞因增殖能力强、持久性好，是 CAR-T 的理想来源。
通过多参数分析可优化分选方案，为后续基因修饰提供优质细胞原料。

 T细胞富集柱

（二）激活与扩增的动态监测

促增殖因子（IL-2、IL-7、IL-15）：反映 T 细胞增殖潜力；

效应因子（IFN-γ、TNF-α）：指示细胞毒性功能；

免疫调节因子（IL-10、TGF-β）：预警过度抑制或耗竭。
动态监测这些因子的浓度变化，可优化激活剂组合与培养时间，避免 T 细胞功能异常。

（三）基因修饰效率的评估

CAR 蛋白表达水平（针对胞外标签的特异性抗体）；

编辑相关标志物（如脱靶效应导致的炎症因子异常分泌），评估修饰的特异性与安全性。
对靶向敲除 PD-1 等免疫检查点的 CAR-T 细胞，可同步验证编辑效果。

四、在信号通路解析与实体瘤研究中的价值

（一）CAR 与 TCR 信号通路的差异分析

CAR 与 TCR 激活后细胞因子分泌的异同（如 IL-2、IFN-γ 的分泌动力学）；

共刺激结构域（4-1BB vs CD28）对信号通路的影响，为 CAR 结构优化提供依据。

（二）肿瘤微环境的复杂性解析

免疫抑制因子（TGF-β、IL-10、VEGF）浓度；

免疫检查点分子（PD-L1、CTLA-4）表达水平；

基质细胞分泌的趋化因子（IL-6、CXCL12），揭示其对 CAR-T 浸润、存活的抑制机制。
这些数据为开发联合疗法（如 CAR-T 与 PD-1 抑制剂联用）提供靶点依据。

 CAR-T细胞在肿瘤微环境中面临内源性和外源性代谢挑战 

五、与其他技术的比较及应用前景

（一）技术互补性

悬浮液相芯片 Luminex 与 ELISA 比较

相较于ELISA，其多重检测能力更强，效率更高且节省样本。

较流式细胞术（擅长细胞表型），更适合可溶性因子的多参数分析；

与蛋白质芯片相比，具有更高灵敏度和更广动态范围。

Luminex 与上述技术形成互补，满足 CAR-T 研究中 “少量样本 - 多指标” 的检测需求。

（二）应用前景

临床前研究：加速 CAR-T 候选疗法的功能筛选与优化；

临床监测：通过外周血分析预测治疗应答与不良反应（如细胞因子释放综合征）；

联合疗法开发：解析 CAR-T 与放化疗、靶向药联用的免疫微环境变化。

六、总结