一、技术原理与背景：从群体检测到单细胞功能定位

二、标准化技术操作：适配风湿免疫科样本特性

1. 板包被与封闭：将特异性捕获抗体稀释后加入 PVDF 板，4℃孵育过夜完成包被；次日用 PBST 洗涤后，加入封闭液室温封闭 1 小时，消除非特异性结合干扰。
2. 细胞接种与刺激：分离样本中的靶细胞（如 T 细胞），调整浓度后接种至包被板，同时加入特异性抗原（如类风湿关节炎相关自身抗原瓜氨酸化蛋白）或刺激剂，37℃、5% CO₂培养箱孵育 18-24 小时，使细胞分泌的 CK 被抗体捕获。
3. 检测与显色：弃去细胞与培养基，洗涤后加入生物素标记的检测抗体，室温孵育 2 小时；再加入碱性磷酸酶（ALP）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，孵育后加入显色底物（如 BCIP/NBT），待斑点清晰后终止反应。
4. 结果分析：使用乐备实 Elispot 读板仪扫描成像，通过软件自动计数斑点数量，计算分泌目标 CK 的细胞频率（斑点数 / 接种细胞数）。

三、核心技术优势：风湿免疫研究的差异化支撑

• 高灵敏度：可检出百万分之一频率的阳性细胞，灵敏度是 ELISA 的 200 倍，能精准捕获风湿免疫病中低丰度的自身反应性 T 细胞。
• 活细胞功能检测：捕获的是细胞受刺激后新分泌的 CK，真实反映细胞的功能活性，而非静态蛋白含量，更贴合体内免疫应答状态。
• 直观可信：单个阳性细胞对应一个斑点，斑点数量直接代表活性细胞数，斑点大小可反映细胞分泌能力的异质性，结果解读更直观。
• 高通量检测：采用 96 孔板体系，单日可完成数百个样本检测，仅需 45 毫升血液即可测试 600 种不同抗原的反应，适配大规模自身抗原筛选场景。

四、科室应用聚焦：助力风湿免疫科类风湿关节炎研究

1. 自身反应性 T 细胞的鉴定与定量：RA 的发病与瓜氨酸化蛋白特异性 T 细胞的活化密切相关，但这类细胞在体内频率极低。通过乐备实 Elispot 技术，可检测患者外周血或滑膜液中针对瓜氨酸化蛋白的 IFN-γ、IL-17 分泌型 T 细胞频率，明确自身反应性 T 细胞与疾病活动度的关联 —— 某三甲医院风湿免疫科的研究显示，RA 患者滑膜液中这类细胞频率是健康人的 8-12 倍，且与 DAS28 评分呈正相关。
2. 治疗方案的疗效评估：传统 RA 治疗疗效评估依赖临床症状评分，缺乏客观的免疫功能指标。利用 Elispot 技术动态监测治疗前后自身反应性 T 细胞的频率变化，可早期评估药物（如 TNF-α 抑制剂）的免疫调节效果 —— 研究发现，治疗有效患者的 IFN-γ 分泌型 T 细胞频率在 2 周内下降 40% 以上，较临床评分提前 3-4 周提示疗效。
3. 发病机制的解析：RA 滑膜炎症中存在 Th1/Th2/Th17 细胞的失衡，但传统方法难以区分不同亚群的功能。乐备实 Elispot 技术可同步检测多种细胞因子（如 IFN-γ 代表 Th1、IL-4 代表 Th2、IL-17 代表 Th17），明确不同 T 细胞亚群在 RA 中的作用 —— 研究证实，RA 患者滑膜液中 Th17 细胞频率显著升高，且其分泌的 IL-17 可促进滑膜成纤维细胞的增殖，为靶向 Th17 的治疗策略提供了实验依据。

五、Elispot检测服务哪里有？

乐备实爆款 Elispot 服务产品

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

 
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