背景： 树突状细胞（DC）通过捕获、处理并向T细胞呈现肿瘤抗原，在抗肿瘤免疫中发挥着关键作用，使基于树突状细胞的免疫疗法成为癌症治疗的有前景方法。然而，最常用的临床策略仍依赖于体外通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白介素-4（IL-4）（GM/IL4-DCs）诱导DC，这常导致细胞群体异质且抗肿瘤功能不佳。本研究中，我们比较了与FMS样酪氨酸激酶3配体（FLT3L）和GM-CSF（FL/GM-DCs）共刺激产生的DC，与传统GM/IL4-DCs。

方法： 为比较不同方法诱导的DC功能差异，我们进行了一项综合研究。小鼠骨髓细胞在含FLT3L/GM-CSF培养基中连续培养9天。细胞采集后，我们利用流式细胞术和scRNA-seq分析了FL/GM-DC的组成、亚群和状态。流式细胞术还用于评估其抗原呈递及刺激T细胞的能力。进行了体内实验，以考察肿瘤模型中的分布、抗肿瘤效果及治疗反应。最后，结合scRNA-seq和scTCR-seq，我们探讨了FL/GM-DC重塑肿瘤微环境的机制。

结果： 结果显示，FL/GM-DC展现出独特的亚群体分布，特点是大量传统cDC亚群体，并展现出增强的交叉抗原呈现能力。值得注意的是，FL/GM-DC能够诱导更广泛且更具肿瘤特异性的CD8 T细胞反应，通过促进细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）的浸润和减少免疫抑制成分，有效地重塑肿瘤微环境。相比之下，GM/IL4-DC含有较少的cDC亚群，导致初始CD8 T细胞反应较弱，抗肿瘤效果相对较差。⁺⁺

结论： 总之，FLT3L结合GM-CSF诱导的DC，通过其独特的亚群组成和功能状态，能够更有效地扩增肿瘤特异性CD8 T细胞并重塑肿瘤微环境，从而实现更优越的免疫治疗效果。本研究凸显了FL/GM-DC作为下一代DC平台的潜力，为基于DC的采样癌症免疫疗法临床转化提升铺平道路。

在抗原刺激和成熟72小时后，FL/GM-DC和GM/IL4-DC培养的上清液中测量了细胞因子和趋化因子水平，包括IL - 12p70、IL - 10、IL - 6、TNF-α、IFN-γ、CCL2、CCL4、CCL5和CXCL1，均在抗原刺激和成熟72小时后测量。

分组：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白介素-4（IL-4）（GM/IL4-DCs）诱导DC；

           FMS样酪氨酸激酶3配体（FLT3L）和GM-CSF（FL/GM-DCs）共刺激产生的DC

Luminex结果图

检测方法：

多重细胞因子检测中，每孔8×10⁵细胞的DC悬浮液在六孔板中培养。在37°C下潜伏24小时后，通过离心法在300×g下收集上清液，持续10分钟。根据制造商说明，使用Luminex多重细胞因子检测法（LabEx Biotech Co.）测量细胞因子水平，包括IL - 6、IL - 10、IL - 12p40、IL - 12p70、CCL2、CCL4、CCL5、CXCL1、肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ。

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