想要一张高分辨率的蛋白互作定位图？
想揭示组织、细胞中“谁在和谁说悄悄话”？
PLA技术（Proximity Ligation Assay）正是你寻找的答案！

但很多实验“挂掉”并非技术问题，而是——样本不合格！

为了帮助大家更高效、安全地完成PLA实验，我们整理了一份「PLA样本准备全流程指南」让您一次上手不踩坑！

样本要求&运输汇总

FFPE 样本石蜡样本：

（1）组织固定要求（FFPE 蜡块与 FFPE 切片都适用）

组织离体时间：缺血离体时间不宜超过 1h，组织块离体后应尽快固定。

组织固定液：推荐 10% NBF 或 4% PFA，10% NBF 穿透力强，4% PFA 穿透力弱一些。

固定时间：根据组织块大小而不同，0.5cm 直径组织块一般 18-24h。固定时间不宜太长，例如几天，几周，甚至几个月。

保存：存放于干燥器中，常温保存。

（2）石蜡切片标准

切片来源蜡块需满足（1）要求；

区域位置：避免用蜡块最表面切片，选用中部组织;

推荐切片厚度：5μm，越薄越好;排列整齐编号入玻片盒，做好封口处理。

FF 样本准备标准（冰冻组织）：

（1）冰冻组织块（FF样本块）

速冻处理：组织离体后立即使用液氮或异戊烷冷冻;使用OCT包埋剂完全包埋；-80°C冷冻保存，确保冻存状态稳定。

（2）FF切片要求：使用冷冻切片机制备;切片后立即贴片到玻片中央区域（远离磨砂边）;

推荐厚度5-10μm，切完即风干并用固定液固定5-10min；切片后用OCT覆盖组织块切口，防止干燥;

保存时限：-80°C储存不超过14天，优选新鲜切片。

细胞爬片：

（1）细胞贴壁与培养容器：建议使用玻片底板、玻片或专用细胞爬片载玻片；可选六孔板、十二孔板等，建议标注编号并正面朝上贴片。

（2）固定：细胞培养结束后，使用4% PFA室温固定10–15分钟;固定后立即用PBS漂洗 2–3 次，去除残留固定液。

（3）保存：固定后的细胞爬片可直接保存在PBS中，并封膜密封；保持水平存放，避免干片和气泡。

PLA技术能将蛋白互作信号精准“点亮”在显微镜下，但这一切的基础，离不开科学、规范的样本准备。

从组织固定到切片厚度，从抗体信息到运输条件，每一步都关乎最终结果的可信度与可重复性。

我们希望这份指南不仅能帮助您顺利开展实验，更能助力您的科研成果迈向更高水平。

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。