蛋白质 - 蛋白质相互作用（PPIs）是细胞信号传导、代谢调控等核心生命活动的 “分子枢纽”，其空间动态变化直接决定细胞功能。传统研究方法如免疫共沉淀需破坏细胞结构，酵母双杂交难以模拟天然微环境，均无法实现原位、高灵敏、低丰度 PPIs的精准解析。而邻近连接检测技术（PLA）的出现，融合抗体特异性与核酸信号放大优势，可在细胞或组织中原位检测距离 <20-40 nm 的 PPIs，不仅 “看见” 互作发生，更 “看透” 其亚细胞定位、动态变化及疾病关联，成为 PPIs 研究的革新工具。
为破解多通路串扰场景下的 PPIs 分析难题，顺序 PLA 通过分阶段加入差异化荧光标记的 PLA 探针，实现单一样本中 47 种蛋白质参与的 PPIs 多重检测。该技术与免疫荧光联用，既能确定 PPIs 在亚细胞结构（如细胞膜、高尔基体）的共定位，又能追踪外界干预下的互作动态。
在 EGFR 突变型非小细胞肺癌研究中，顺序 PLA 清晰揭示：奥希替尼处理 24 小时后，细胞膜上 EGFR-AKT 互作斑点减少 60%，细胞质中 EGFR-STAT3 互作增强（提示通路代偿）；基于空间互作数据构建的图卷积网络，可精准预测单细胞药物处理状态（准确率 92%），为靶向 PPIs 药物设计提供依据。
环形 PLA 通过 “环形 DNA 形成” 优化反应设计：目标蛋白互作时，探针寡核苷酸形成线性前体，经连接酶催化为闭合环形 DNA，再通过核酸外切酶降解未环化序列去除背景。这一设计带来三重优势：降低随机连接背景、提升检测选择性，且兼容低亲和力抗体 —— 在人体血浆中对 CA125 的检测灵敏度较传统 PLA 提升 3-5 倍，重现性（CV<8%）更优，为临床缺乏高亲和力试剂的场景提供新路径。
蛋白互作PLA技术原理是什么：基于邻位连接技术，通过DNA环化扩增产生可检测荧光信号。
PLA 通过 “两步协同” 实现 PPIs 检测：
特异性识别：两种不同物种一抗分别结合目标 PPIs 的两个蛋白，再结合偶联寡核苷酸的 PLA 探针（二抗）；
信号放大：若蛋白互作（距离 < 20-40 nm），探针寡核苷酸靠近，启动滚环 DNA 合成（RCA），生成大量重复序列；
荧光检测：荧光标记的互补探针结合 RCA 产物，形成高浓度荧光斑点，每个斑点代表一组原位 PPIs，可量化互作水平。
超高灵敏度：RCA 放大效率达 10³-10⁴倍，可检测 fM 至 nM 级低丰度 PPIs，适用于循环肿瘤细胞等微量样本；
原位保留信息：无需破坏细胞，可在活细胞 / 组织中检测，同时保留亚细胞定位，解析互作的空间调控；
强兼容性：无需纯化蛋白，可与免疫荧光、流式细胞术、ELISA 联用，形成 “互作 - 表达 - 功能” 完整研究链。
淋巴瘤：PLA 发现弥漫性大 B 细胞淋巴瘤中，MYC 与 BCL-2 互作显著富集，该互作抑制 MYC 介导的凋亡，与预后负相关，为靶向药物开发提供靶点；
肺癌：动态追踪 EGFR 突变型 NSCLC 中 EGFR 与 PI3K/SRC 的互作，奥希替尼耐药细胞中 EGFR-SRC 互作增强，提示 SRC 抑制剂可逆转耐药。
在 PD-1/PD-L1 免疫治疗中，PLA 检测 T 细胞 PD-1 与肿瘤细胞 PD-L1 的原位互作 —— 抗 PD-1 抗体处理后，互作斑点减少 80%，减少程度与患者客观缓解率正相关，为临床用药提供分子标志物。
遗传性心肌病中，MYBPC3 突变减弱其与肌动蛋白的互作；PLA 结合单分子成像显示，患者心肌组织中该互作斑点密度降低，且降低程度与心肌肥厚正相关，助力罕见病机制解析与诊断。
PLA 技术仍有广阔优化空间：技术上，结合微流控可实现高通量检测，适配临床大样本；应用上，可拓展至类器官、活体成像，解析生理病理下 PPIs 动态网络；临床转化上，c-PLA 有望开发为 PPIs 靶向诊断试剂，用于肿瘤早期筛查。蛋白互作PLA结果怎么分析通过计数每个细胞内的荧光点数目进行定量统计分析。未来，PLA 将推动 PPIs 研究从 “定性” 向 “定量、原位、动态” 跨越，为生命科学与临床诊断带来更多突破。
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