类风湿关节炎（RA）、炎症性肠病（IBD）、银屑病（Ps）和系统性红斑狼疮（SLE）等自身免疫或免疫介导性炎症疾病，虽然累及的组织和临床表现不同，却有一个共同特点：疾病的发生发展并非由单一细胞因子驱动，而是多种细胞因子共同作用的结果[1]。
早期研究多以Th1/Th2平衡解释自身免疫反应。随着IL-23/IL-17轴、Treg及其他免疫通路不断被发现，研究者逐渐认识到，细胞因子之间存在协同、拮抗、反馈调节和交叉作用。同一种细胞因子还可能表现出多效性、功能重叠甚至“双重作用”，其具体功能会受到疾病阶段、局部微环境及其他免疫信号的影响。因此，仅检测单个因子，往往难以完整反映自身免疫病复杂的炎症状态[2]。
图：银屑病中的细胞因子网络及治疗靶点
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人（Human）
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| LXLSH10-1 | 人固有免疫-10因子检测服务 | Luminex | IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8/CXCL8, IL-10, IL-13, TNF-α, IFN-γ |
| LXLSH15-1 | 人细胞因子-15因子Panel检测服务 | Luminex | IL-1β/IL-1F2,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8/CXCL8,IL-10,IL-12p70,IL-13,TNF-α,IFN-γ,IL-17A,IFN-α,GM-CSF,MCP-1 |
| LXLBH27-1 | 人细胞因子-27因子检测服务 | Luminex | G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-17A, IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8/CXCL8, MCP-1/CCL2, MIP-1β, TNF-α, IL-1Rα/IL-2Rα, IL-9, IL-15, FGF-basic/β-FGF, Eotaxin/CCL11, IP-10/CXCL10, MIP-1α/CCL3, PDGF-BB, RANTES/CCL5, VEGF-A |
| LXLRH46-1 | 人细胞因子-46因子检测服务 | Luminex | Eotaxin/CCL11, G-CSF, GM-CSF, GRO-α/CXCL1, IFN-α2, IFN-γ, IL-1α, IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8/CXCL8, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-17/IL-17A, TNF-β, TNF-α, VEGF, CCL2/JE/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CCL4/MIP-1β, CCL5/RANTES, CCL19/MIP-3β, CCL20/MIP-3α, CD40 Ligand/TNFSF5, CXCL2/GRO-β/MIP-2/CINC-3, CXCL10/IP-10/CRG-2, EGF, FGF-basic/FGF2/bFGF, Flt-3 Ligand/FLT3L, Granzyme B, IL-1ra/IL-1Rα, IL-17E/IL-25, IL-33, Lymphotactin/XCL1, PD-L1/B7-H1, PDGF-AA, PDGF-AB/BB, TGF-α, TRAIL/TNFSF10 |
小鼠（Mouse）
| 官网货号 | 检测服务 | 技术平台 | 检测指标 |
| LXLBM10-1 | 小鼠炎症-10因子检测服务 | Luminex | IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, CXCL1/GRO-α/KC/CNNC-1, IFN-γ, TNF-α |
| LXLBM23-1 | 小鼠细胞因子-23因子检测服务 | Luminex | G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IL-1α, IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-17A, GRO-α/CXCL1, MCP-1/CCL2, MIP-1α/CCL3, RANTES/CCL5, TNF-α, Eotaxin/CCL11, IL-3, IL-9, IL-12(p40), MIP-1β |
| LXLBM31-1 | 小鼠趋化因子-31因子检测服务 | Luminex | BCA-1/CXCL13, CTACK/CCL27, ENA-78/CXCL5, Eotaxin/CCL11, Eotaxin-2/CCL24, Fractalkine/CX3CL1, GM-CSF, I-309/CCL1, IFN-γ, IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-16, IP-10/CXCL10, I-TAC/CXCL11, KC/CXCL1, MCP-1/CCL2, MCP-3/CCL7, MCP-5/CCL12, MDC/CCL22, MIP-1α/CCL3, MIP-1β/CCL4, MIP-3α/CCL20, MIP-3β/CCL19, RANTES/CCL5, SCYB16/CXCL16, SDF-1α/CXCL12, TARC/CCL17, TNF-α |
大鼠（Rat）
| 官网货号 | 检测服务 | 技术平台 | 检测指标 |
| LXLBR10-1 | 大鼠炎症-10因子检测服务 | Luminex | IL-1β/IL-1F2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, CXCL1/GRO-α/KC/CINC-1, IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-12p70 |
| LXLBR23-1 | 大鼠细胞因子-23因子检测服务 | Luminex | G-CSF, GM-CSF, GRO-α/CXCL1, IFN-γ, IL-1α, IL-1β/IL-1F2, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-17A, MCP-1/CCL2, MIP-1α/CCL3, RANTES/CCL5, TNF-α, IL-7, IL-18, M-CSF, MIP-3α/CCL20, VEGF |
自身免疫患者临床异质性明显，不同疾病活动度、器官受累及治疗状态下，细胞因子水平可能存在较大差异；同时，样本类型、前处理方式、冻融次数、样本基质及上板设计等因素，也可能影响最终检测结果。但需要注意的是，Panel选对了只是第一步,下面这4个细节不注意，数据基本白做。
自身免疫样本做多因子检测，四大注意细节
细节一：只记录疾病名称，不做临床分层
同样是SLE患者，不同疾病活动度、器官受累及治疗阶段的细胞因子表现可能并不相同。已有研究根据SLEDAI将患者分为轻度、中度和重度活动组，发现各组呈现出不同的细胞因子特征；合并狼疮性肾炎与未合并肾炎的患者，部分因子表达也存在差异[3]。
另一项贝利尤单抗治疗研究显示，患者治疗后IFN-α2、IL-6和IL-10水平随时间发生变化。研究同时记录了疾病活动度、泼尼松剂量、既往及同期用药和采样时间，提示治疗状态也是解释细胞因子结果时不可忽视的因素[4]。
因此，建议至少同步记录：
○ 疾病活动度或临床评分；
○ 重要器官受累及临床亚型；
○ 当前用药种类、剂量和治疗时间；
○ 样本采集是在治疗前还是治疗后。
否则，检测到的差异可能同时受到疾病阶段和治疗状态影响，难以准确归因于疾病本身。
细节二：样本处理不统一，组间差异可能是“人为制造”的
细胞因子对样本前处理条件较为敏感。研究发现，EDTA血浆、枸橼酸钠血浆、肝素血浆和血清中，同一细胞因子的检测水平可能并不一致，尤其是IFN-γ、IL-6、IL-10和TNF-α等指标。因此，病例组和对照组不能混用不同类型的样本[5]。
除样本类型外，采血后至离心的等待时间、放置温度及离心条件也可能改变检测结果。例如，室温延迟离心3小时后，IL-17A和IL-6水平已出现下降；不同处理温度对部分趋化因子和炎症因子的影响还可能因指标、样本类型甚至个体而异[5-6]。
因此，建议：
○ 病例组和对照组使用同一种样本类型及采血管；
○ 统一采血后静置时间和离心前等待时间；
○ 统一离心力、离心时间及离心温度；
○ 离心后及时分装，并统一保存温度和保存流程；
○ 对偏离标准操作流程的样本做好记录，必要时单独分析。
否则，最终观察到的组间差异，可能来自样本处理流程，而不是真实的疾病差异。
细节三：反复冻融，细胞因子结果可能“越测越偏”
自身免疫研究中常见的IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子，对冻融和长期保存条件较为敏感。反复冻融可能造成蛋白降解、聚集或吸附，使检测结果偏低，甚至改变不同样本之间原有的趋势[7]。
建议标准操作为：
○ 首次处理后按单次实验用量分装；
○ 推荐每管50～200 μL，具体结合检测用量；
○ 长期保存统一置于−80℃；
○ 最好仅解冻一次，原则上尽量不超过两次；
○ 解冻后充分混匀并立即检测，不再二次冻存；
○ 病例组和对照组的冻融次数必须一致。
反复冻融带来的影响并不只是“数值变低”，更可能是不同因子升降不一，最终改变样本之间原有的差异和趋势。
细节四：不做预实验，忽略检测范围和自身抗体干扰
自身免疫样本具有两个明显特点：
○ 不同因子的浓度跨度较大。同一个稀释倍数下，部分因子可能超过检测上限，另一些因子却低于定量下限[8-9]。
○ RA、SLE患者样本中可能存在类风湿因子、异嗜性抗体及其他自身抗体，对夹心免疫检测产生异常干扰，造成假性升高或结果不呈线性[9]。
正式检测前建议：
○ 选择代表性样本进行预实验；
○ 确认合适的稀释倍数和检测范围；
○ 异常高值样本进行梯度稀释；
○ 必要时开展加标回收和平行性验证；
预实验不只是确认“能不能测到”，更重要的是提前发现超范围、基质干扰和板间差异，避免正式实验完成后数据无法解释。
以上就是今天介绍的全部内容~
参考文献：
【1】Moudgil KD, Choubey D. Cytokines in autoimmunity: role in induction, regulation, and treatment. J Interferon Cytokine Res. 2011 Oct;31(10):695-703. doi: 10.1089/jir.2011.0065. Epub 2011 Sep 23. PMID: 21942420; PMCID: PMC3189547.
【2】Sieminska I, Pieniawska M, Grzywa TM. The Immunology of Psoriasis-Current Concepts in Pathogenesis. Clin Rev Allergy Immunol. 2024 Apr;66(2):164-191. doi: 10.1007/s12016-024-08991-7. Epub 2024 Apr 20. PMID: 38642273; PMCID: PMC11193704.
【3】Xue D, Qian Y, Tu X, He M, Xing F, Ren Y, Yuan C. The effect of circulating cytokines on the risk of systemic lupus erythematosus: Mendelian randomization and observational study. Immunogenetics. 2024 Dec;76(5-6):315-322. doi: 10.1007/s00251-024-01351-x. Epub 2024 Aug 26. PMID: 39183206; PMCID: PMC11496328.
【4】Royo M, Joseph-Mullol B, Sandoval S, Moliné T, Solé C, Cortés-Hernández J. Integrative miRNA-mRNA profiling uncovers mechanisms of belimumab action in systemic lupus erythematosus. Front Immunol. 2025 Mar 14;16:1553971. doi: 10.3389/fimmu.2025.1553971. PMID: 40160819; PMCID: PMC11949941.
【5】Verberk IM, Nossent EJ, Bontkes HJ, Teunissen CE. Pre-analytical sample handling effects on blood cytokine levels: quality control of a COVID-19 biobank. Biomark Med. 2021 Aug;15(12):987-997. doi: 10.2217/bmm-2020-0770. Epub 2021 Jul 22. PMID: 34289718; PMCID: PMC8359910.
【6】Ashworth M, Small B, Oldfield L, Evans A, Greenhalf W, Halloran C, Costello E. The holding temperature of blood during a delay to processing can affect serum and plasma protein measurements. Sci Rep. 2021 Mar 22;11(1):6487. doi: 10.1038/s41598-021-85052-5. PMID: 33753773; PMCID: PMC7985364.
【7】de Jager W, Bourcier K, Rijkers GT, Prakken BJ, Seyfert-Margolis V. Prerequisites for cytokine measurements in clinical trials with multiplex immunoassays. BMC Immunol. 2009 Sep 28;10:52. doi: 10.1186/1471-2172-10-52. PMID: 19785746; PMCID: PMC2761376.
【8】Browne RW, Kantarci A, LaMonte MJ, Andrews CA, Hovey KM, Falkner KL, Cekici A, Stephens D, Genco RJ, Scannapieco FA, Van Dyke TE, Wactawski-Wende J. Performance of multiplex cytokine assays in serum and saliva among community-dwelling postmenopausal women. PLoS One. 2013;8(4):e59498. doi: 10.1371/journal.pone.0059498. Epub 2013 Apr 5. PMID: 23577067; PMCID: PMC3618114.
【9】Rosenberg-Hasson Y, Hansmann L, Liedtke M, Herschmann I, Maecker HT. Effects of serum and plasma matrices on multiplex immunoassays. Immunol Res. 2014 May;58(2-3):224-33. doi: 10.1007/s12026-014-8491-6. PMID: 24522699; PMCID: PMC4332596.
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